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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> GSH過(guò)氧化物酶4抑制劑(RSL3)
貨號(hào) | FS-X10409 |
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中文名稱(chēng):GSH過(guò)氧化物酶4抑制劑(RSL3)
英文名稱(chēng):RSL3
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg
貨號(hào):FS-X10409
產(chǎn)品介紹:
英文名稱(chēng):RSL3 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg RSL3是GSH過(guò)氧化物酶4的抑制劑,能夠阻礙GSH的合成,IC50值是100nM. 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):1219810-16-8 別名:1S,3R-RSL3 純度:99.59% 分子量:440.88 結(jié)構(gòu)式: RSL3 1S,3R-結(jié)構(gòu)式 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
Micrococcus yunnanensis蛋白激C亞型G抗體Anti-APCS Antibody激M2型同工(M2-PK)
灰黃鏈霉菌磷化蛋白激C亞型G抗體Anti-APEX2 Antibody激(PK)
葉點(diǎn)霉磷化蛋白激C亞型G抗體Anti-APLP1 Antibody(MGO)
膠孢肝再生磷酯1抗體Anti-APH1A Antibody二單酰(malonyl CoA)
Microbacterium terricola磷酯3蛋白抗體Anti-APEX2 Antibody二(MDA)
黃孢紫紅菇果糖-2,6-二磷心肌抗體Anti-API5 Antibody轉(zhuǎn)/谷轉(zhuǎn)(ALT/GPT)
齊藤隱球酵母磷變位1抗體Anti-APLN Antibody別孕烯/3α,5α-四氫孕(AP/3α,5α-THP)
寡氧單胞菌磷激1抗體Anti-APLP1 Antibody表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)
蠟樣芽孢桿菌羧化抗體Anti-APLP2 Antibody表皮活化肽因子(CAPF)
金針菇F39脫氫復(fù)合物X蛋白抗體Anti-APOA1 Antibody表皮生長(zhǎng)因子樣結(jié)構(gòu)域蛋白7(EGFL7)
根瘤菌磷烯羧激抗體Anti-APLP1 Antibody表皮生長(zhǎng)因子(EGF)
紅色鹽顆粒形菌果糖-2,6-二磷1抗體Anti-APOA1 Antibody表皮角蛋白(EK)
籬邊粘褶菌磷化6磷果糖激抗體Anti-APOA1 Antibody(PB0887)表面膜免疫球蛋白M(mIgM)
松鼠葡萄球菌松鼠亞種p21蛋白抗體Anti-APOB Antibody表面膜免疫球蛋白D(mIgD)
丁梭菌(丁桿菌)P選擇糖蛋白配體1抗體Anti-APOB Antibody(PB1096)表面膜免疫球蛋白A(mIgA)
釀酒酵母絲蛋白2抗體Anti-APOA1 Antibody(PB0888)表面活性蛋白D(SP-D)
木霉Trichoderma│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
曲霉Aspergillus│oryzae 質(zhì)量規(guī)格:含量98~101%,BR
擬青霉Paecilomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
GSH過(guò)氧化物酶4抑制劑(RSL3)毛霉屬 N-Phenyl-benzimidoyl chloride血小板衍化生長(zhǎng)因子AB
皺褶莫氏黑粉 2-巰基甲酯溶血
淺黃色假單胞 5-甲氧基苯并咪唑磷脂酰乙
植物乳桿 二甲尿
燕麥?zhǔn)任鞴蟻喎N* 4-溴甲基喹啉-2-酮卵泡
大果毛殼 3-巰基脂肪
Actinomonospora 4-喹啉羧過(guò)氧化物
炭疽芽胞桿 3-茴香硫細(xì)小病
殺結(jié)節(jié)鏈霉 3--5-氟苯鵝細(xì)小病
大腸埃希 2,3-二吡1-3-β-D葡聚糖
費(fèi)氏中華根瘤 2-(甲基)苯并咪唑鵝細(xì)小病抗體
三鏈霉 2-羥并咪唑加壓
香氣紅冬孢鎖擲孢酵母 2-(二苯基膦基)乙半胱蛋白8
阿薩希絲孢酵母 N4-苯甲?;?2'-脫氧胞半胱蛋白9
猶他游動(dòng)放線 2,2-二甲基-3-羥基酪
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