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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> JAK2抑制劑(AZD-1480)
貨號(hào) | FS-X10523 |
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產(chǎn)品介紹:
英文名稱:AZD-1480 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg AZD-1480是一種新穎的JAK2的ATP競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑,IC50值為0.26nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):935666-88-9 別名:AZD1480;AZD 1480 純度:99.37% 分子式:C??H??ClFN? 分子量:348.77 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
中文名稱:JAK2抑制劑(AZD-1480)
英文名稱:AZD-1480
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg
貨號(hào):FS-X10523
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
馬特鏈霉菌髓系觸發(fā)受體1抗體Anti-IL1B Antibody碳酐Ⅱ(CA2)
樟疫霉抑制劑抗體Anti-IL1R1 Antibody碳酐Ⅰ(CA1)
橙色農(nóng)霉菌味覺感受器蛋白T2R6抗體Anti-IL2 Antibody碳分解代謝物阻遏4樣蛋白(CCRN4L)
多主葡萄座腔菌味覺感受器蛋白T2R38抗體Anti-IL2 Antibody炭疽熱受體2(ANTXR2)
鼠李糖乳桿菌5色羥化2抗體Anti-IL2 Antibody肽酰甘α?;瘑窝?PAM)
毛柄金錢菌(金針菇)硫氧還蛋白11抗體Anti-IL2 Antibody肽抑制因子16(PI16)
其他質(zhì)粒菌種微管蛋白4α抗體Anti-IL22 Antibody肽抑制因子15(PI15)
污黑腐皮殼動(dòng)力蛋白輕鏈Anti-IL22 Antibody肽D(PEPD)
佛羅里達(dá)側(cè)耳腫瘤壞死因子誘導(dǎo)蛋白8樣蛋白2/TNFα-IP 8L2抗體Anti-IL2 Antibody肽聚糖識(shí)別蛋白2(PGLYRP2)
茄腐鐮刀菌血小板生成受體抗體Anti-IL22 Antibody肽聚糖識(shí)別蛋白1(PGLYRP1)
棘腐霉跨膜絲蛋白5抗體Anti-IL2 Antibody肽基脯酰異構(gòu)F(PPIF)
枯草芽孢桿菌脫中胚蛋白抗體Anti-IL23A Antibody肽基脯酰異構(gòu)E(PPIE)
杰丁畢赤酵母生長(zhǎng)抑制基因1蛋白抗體Anti-IL23A Antibody肽基脯酰順反式異構(gòu)NIMA相互作用蛋白4(PIN4)
嗜角蛋落霉甲狀腺T4抗體Anti-IL23R Antibody肽基精脫亞Ⅵ(PADI6)
粉紅聚端孢霉轉(zhuǎn)錄因子CP2抗體Anti-IL25 Antibody肽基精脫亞Ⅳ(PADI4)
粉紅單端孢甲基雙加氧TET2抗體Anti-IL27 Antibody胎球蛋白B(FETUB)
SCEL蛋白抗體白色食藻菌小鼠尿道上皮細(xì)
相關(guān)抗原8抗體遲緩愛德華氏菌(暫無(wú))小鼠輸尿管上皮細(xì)胞
T淋巴細(xì)胞識(shí)別的鱗狀細(xì)胞抗原抗體皮氏羅爾斯通氏菌小鼠腎管狀上皮細(xì)胞
信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)銜接蛋白1抗體馬氏鏈球菌小鼠子宮頸上皮細(xì)胞
JAK2抑制劑(AZD-1480)*松乳菇 (R)-(+)-3-羥基鹽鹽促腎上腺皮質(zhì)
單孢霉 9,9-二辛基-2,7-二溴基芴促腎上腺皮質(zhì)釋放
解糖假蒼白桿 D-苯甘甲酯鹽鹽促甲狀腺釋放
短波單胞屬 煙堿-N-氧化物生長(zhǎng)
黑靈芝 FMOC-L-炔基甘半胱蛋白-3
Olivibacter sitiensis FMOC-L-4-溴苯乙型肝炎病表面抗原
解脂亞羅酵母 Fmoc-L-2-苯甲型肝炎病表面抗原
錐形赤褶菇1-1 二甲基烯新戊二酯谷脫羧65
根霉 FMOC-D-4-溴苯降鈣
豬丹絲 5ˊ-Bromo-2ˊ-fluoroacetophenone瘦
托魯斯山鏈霉(公牛鏈霉) 1,6-雙(二苯基膦基)己烷活化蛋白C
柄籃狀 1--3-(三氟甲氧基)苯補(bǔ)體片斷3a
土棲假葡萄孢 9,9-二甲基氧雜蒽補(bǔ)體1q
青枯假單胞 4'-羥基聯(lián)苯基-4-甲D型逆轉(zhuǎn)錄病抗體
福山淺黃酵母 芐氧基乙酰血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體3
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