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貨號 | FS-X10350 |
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產(chǎn)品介紹:
英文名稱:IPI549 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg IPI549是一種有效的選擇性PI3Kγ抑制劑,IC50為16nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:1693758-51-8 純度:99.14% 分子量:528.56 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
中文名稱:PI3Kγ抑制劑(IPI549)
英文名稱:IPI549
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號:FS-X10350
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
芽胞桿菌ATCC 9372;(曾用名:枯草芽胞桿菌黑色變種)單酰甘油脂肪抗體Human SESN1(Sestrin-1) 利尿肽(KP)
枯草芽孢桿菌致癌基因n-Myc抗體Human GHRH(Somatoliberin) 冷誘導RNA結(jié)合蛋白(CIRBP)
戊糖乳桿菌多藥耐藥相關蛋白3抗體Human CGB(CGβ(Chorionic Gonadotrophin Beta) ) 冷球蛋白(CG)
枯草芽孢桿菌線粒體轉(zhuǎn)錄終止因子1抗體Human TAGLN2(Transgelin-2) 類粘蛋白2(ORM2)
拱狀靈芝蛋白激MST2抗體Human SFRP2(Secreted frizzled-related protein 2) 類粘蛋白(ORM)
*灰葡萄孢DNA結(jié)合蛋白C抗體Human IFNGR1(Interferon gamma receptor 1) 類似60S核糖體蛋白L21(LOC382344)
Chitinophagaceae sp.胃粘液抗體Human SULF2(Extracellular sulfatase Sulf-2) 類肌腱蛋白c(TNC)
巴氏醋桿菌巴氏亞種促黑激γ抗體Human CSTA(Cystatin-A) 類肌腱蛋白(TN)
阪崎腸桿菌抗體Human NAA20(N-alpha-acetyltransferase 20) 類固抗體(SCA)
類干酪乳桿菌結(jié)腸癌相關蛋白MIC1抗體Human HBA1(Hemoglobin subunit alpha) 類風濕因子(RF)
囊狀匐柄霉組織相容性復合體β抗體Human STEAP1(Metalloreductase STEAP1) 類白抗原G(HLA-G)
香菇Myc基因肺癌相關蛋白抗體Human HIF1AN(Hypoxia-inducible factor 1-alpha inhibitor) 類白抗原E(HLA-E)
蘇云金芽孢桿菌糖蛋白gp330抗體Human TAGLN2(Transgelin-2) 類白抗原C(HLA-C)
人參土地桿菌磷化肌原調(diào)節(jié)蛋白抗體Human SESN1(Sestrin-1) 類白抗原B27(HLA-B27)
Rhizobium vitis造血祖激1抗體Human GHRH(Somatoliberin) 類白抗原A(HLA-A)
大腸埃希氏桿菌絲裂原活化蛋白激MAP4K4抗體Human PDE4B(cAMP-specific 3′,5′-cyclic phosphodiesterase 4B) 雷帕霉靶蛋白(mTOR)
鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR楊
型副傷門氏菌Salmonella│paratyphiA 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
木霉Trichoderma│sp. 質(zhì)量規(guī)格:BR,日本進口分裝麝香
PI3Kγ抑制劑(IPI549)細枝孢 (-)-10,2-樟腦磺內(nèi)??购四ぬ堑鞍?10抗體
嗜麥芽黃單胞 (1R,2S)-(+)-2,10-樟腦內(nèi)磺酰抗核小體抗體IgG
樟疫霉 (1S)-(+)-樟腦-10-磺??辜谞钕龠^氧化物抗體
簡青霉 (-)-10-樟腦磺??辜谞钕偾虻鞍卓贵w
Enterobacter sp. 辛可寧鹽鹽水合物抗性磷
鼠李糖乳桿 L-(-)樟腦磺抗性磷5b
平流層芽孢桿 辛可尼定抗內(nèi)皮抗體
黃曲霉 (S)-4--3-羥基丁乙酯抗凝血Ⅲ
植物乳桿植物亞種 (R)4--3-羥基丁乙酯抗平滑肌抗體
玉黑粉 膽固甲酯抗神經(jīng)節(jié)脂抗體
香菇 辛可寧抗雙鏈DNA抗體;天然DNA抗體
葡萄座腔 (+)-10-樟腦磺抗胰島受體抗體
亞褐鈸孔 (-)二異松蒎基烷可溶性CD36
*百脈根根瘤 (2S,8aR)-(-)-(樟腦磺酰)啞可溶性CD40配體
多主葡萄殼 辛可尼定硫鹽二水合物可溶性E選擇
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