γ-分泌酶抑制劑(YO-01027)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10943

中文名稱：γ-分泌酶抑制劑(YO-01027)

英文名稱：YO-01027

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg

貨號(hào)：FS-X10943

產(chǎn)品介紹:

YO-01027(Dibenzazepine;DBZ)是高效的γ-分泌酶抑制劑，裂解Notch和APPL的IC50分別為2.92±0.22和2.64±0.30nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：209984-56-5

別名：Dibenzazepine;DBZ

純度：98.22%

分子量：463.48

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

膠孢人ras同源物基因家族成員bLysinibacillus sphaericus小鼠腫瘤特異生長因子/腫瘤相關(guān)因子(TGSF)

團(tuán)炭角菌人假定蛋白LOC677340Bacillus sp.小鼠羥脯(Hyp)

紫色直絲鏈霉菌人假定蛋白LOC433328Bacillus sp.小鼠羥脯(Hyp)

鏈格孢菌人髓樣分化因子初次應(yīng)答基因88Lysinibacillus sphaericus小鼠骨保護(hù)配體(OPGL)

果生鏈核盤菌人干擾活化基因205Lysinibacillus sphaericus小鼠骨保護(hù)配體(OPGL)

擬盤多毛孢人組織相容性2-K1-K 區(qū)Lysinibacillus sphaericus小鼠乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)

兔出血癥病人白免疫球蛋白樣受體亞家族B成員4Lysinibacillus sphaericus小鼠乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)

假單孢菌人C型凝集結(jié)構(gòu)域家族4成員ELysinibacillus sphaericus小鼠抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)

蘇云金芽孢桿菌人假定蛋白LOC677168Lysinibacillus sphaericus小鼠抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)

Malassezia cuniculi人淋巴抗原6復(fù)合物基因座ALysinibacillus sphaericus小鼠鐵蛋白(FE)

褐囊蜜環(huán)菌人嗜性白血球相關(guān)之RNA水解酵家族成員1Lysinibacillus sphaericus小鼠鐵蛋白(FE)

釀酒酵母人混合系列蛋白激樣結(jié)構(gòu)域Lysinibacillus sphaericus小鼠碳酐2(CA-2)

固氮菌人過氧化物體增殖激活物受體γ輔激活因子1αLysinibacillus sphaericus小鼠碳酐2(CA-2)

豇豆慢生根瘤菌人類似cDNA順序BC027382Lysinibacillus sphaericus小鼠色上皮衍生因子(PEDF)

松口蘑人類似RIKEN cDNA 4931408D14 基因Lysinibacillus sphaericus小鼠色上皮衍生因子(PEDF)

詹氏桿菌人REST協(xié)阻抑因子3Lysinibacillus sphaericus小鼠解整合樣金屬蛋白8(ADAM8)

鋅指蛋白X染色體蛋白抗體暗褐網(wǎng)柄牛肝菌草魚魚鰾上皮樣細(xì)胞系

鋅指蛋白744抗體小克銀漢霉表達(dá)HP6H8抗體的中國倉鼠卵巢細(xì)胞株

鋅指蛋白ZBBX抗體酒香酵母牛甲狀腺細(xì)胞系

鋅指蛋白575抗體疣孢青霉猴胎腎細(xì)胞
γ-分泌酶抑制劑(YO-01027)黑木耳二苯并噻吩三磷腺

異配囊接霉卵孢變種磺苯甲酰磺嘧啶

西溪土土地桿磺乙酰鈉單不飽和脂肪

豌豆根瘤磺二甲氧嘧啶多不飽和脂肪

鍺栓孔 2,6-二苯脂聯(lián)

黑曲霉苯佐抵抗

類芽孢桿屬去甲替林鹽鹽膽囊收縮

產(chǎn)黃青霉鹽阿替林甘油三酯

阿爾賓娜鞘氨單胞 1-氨基環(huán)烷羧高密度脂蛋白

空腸彎曲桿* 4-松油低密度脂蛋白

芽胞桿泰妙游離脂肪

根瘤麥芽五糖糖化血紅蛋白

大球蓋菇 β-丁香烯末端糖基化

密蘇里游動(dòng)放線

腐皮鐮孢甲芬那黑色

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