參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因玉米品系5307核酸檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：48T   0.1PCR管
產(chǎn)品貨號(hào)：FS-P10748
產(chǎn)品分類：熒光探針法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸：低溫、避光，快遞免費(fèi)送貨上門。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測(cè)試劑盒 。
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實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR：
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí)，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對(duì)數(shù)期），此時(shí)微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知樣品進(jìn)行定量測(cè)定，因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確，重現(xiàn)性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測(cè)等諸多領(lǐng)域。
定量PCR方法：
a、競(jìng)爭(zhēng)法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競(jìng)爭(zhēng)性模板。在同一反應(yīng)管中，待測(cè)樣品與競(jìng)爭(zhēng)模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增（其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記）。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競(jìng)爭(zhēng)性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段，而待測(cè)模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測(cè)定熒光強(qiáng)度，根據(jù)已知模板推測(cè)未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí)，內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同，二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度，以內(nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測(cè)模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標(biāo)記引物，擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合，再加入抗di高辛或生物素酶標(biāo)抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn)，若加入內(nèi)標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，也可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)目的。
 -1549℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

中國臺(tái)灣假單胞菌近海細(xì)菌模式菌株: no沉積物/池塘水草根淤泥提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 471生長條件: 25℃

范麗德巴利酵母培養(yǎng)基: 33模式菌株: no醬油沉淀物提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1生長條件: 30℃ -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法;其他

糙梗青霉生長條件: 25℃培養(yǎng)基: 0013提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

蘇云金芽孢桿菌日本亞種培養(yǎng)基: 266對(duì)比、研究、分析作對(duì)比標(biāo)準(zhǔn)株提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no生長條件: 28-30℃ 真空冷凍干燥法

利文斯頓島希瓦氏菌培養(yǎng)基: 471微生物/耐冷菌水樣/海冰提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no生長條件: 15℃ 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

樟疫霉培養(yǎng)基: 14模式菌株: no根系提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1生長條件: 25-27 定期移植法

 -1550℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

草莖點(diǎn)霉培養(yǎng)基: CM0014模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1生長條件: 26C -80℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

不動(dòng)桿菌屬培養(yǎng)基: CM0002模式菌株: no冬蟲夏草菌膜提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1生長條件: 37℃ -80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

蘇云金芽胞桿菌培養(yǎng)基: 0002模式菌株: no含笑提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1生長條件: 30℃ -80℃冰箱凍結(jié)法

深綠木霉生長條件: 25℃，好氧枯枝模式菌株: 未知培養(yǎng)基: PDA

蔥頭假單孢菌生長條件: 30℃培養(yǎng)基: 14提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no -80℃冰箱凍結(jié)法

耐久腸球菌研究分析模式菌株: no乳汁提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2培養(yǎng)基: 396生長條件: 37

 -1551℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

 370041　z4,z23　-模式菌株: no種屬: Salmonella│waycross提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2培養(yǎng)基: CM0051生長條件: 37℃

山麥冬皂苷BAnti-HMGA1 (high mobility group AT-hook 1)  高遷移率族蛋白A1抗原TRPM6  瞬時(shí)受體電位離子通道蛋白6抗體（M亞家族）

亞麻木酚素SDGHMGA2 (high mobility group A2)  高遷移率族蛋白A2抗原TRPM5  瞬時(shí)受體電位離子通道蛋白5抗體（M亞家族）

α-倒捻子素HO-1/HSP32 (Hemeo xygenase 1)  血紅素氧合酶-1/熱休克蛋白-32抗原TRPM4  瞬時(shí)受體電位離子通道蛋白4抗體（M亞家族）

β-倒捻子素HO-1/HSP32(Hemeo xygenase 1)  血紅素氧合酶-1/熱休克蛋白-32抗原TRPM3  瞬時(shí)受體電位離子通道蛋白3抗體（M亞家族）

3-異倒捻子素HO-2(Heme oxygenase 2)  血紅素氧合酶-2抗原TRPM2  瞬時(shí)受體電位離子通道蛋白/M亞家族抗體

菊苣phospho-HP1/heterochromatin protein 1 (pTyr24)(fruit fly)  異染色質(zhì)蛋白1(磷化多肽)TRPM1  瞬時(shí)受體電位離子通道蛋白1抗體（M亞家族）

梭砂貝母堿phospho-heterochromatin protein 1 (pTyr41)peptide  異染色質(zhì)蛋白1（磷化多肽）TRPC6  瞬時(shí)受體電位離子通道蛋白6抗體

地膚子皂苷IcHPV16-E6/E6 protein(Human papillomavirus type 16)  人類乳頭狀瘤病16抗原TRPC3  色氨相關(guān)蛋白3抗體

大薊苷柳穿魚葉苷HPV18 E6  人類乳頭狀瘤病18E6TRP2  酪氨酶相關(guān)蛋白2抗體

2”-O-沒食子?；鸾z桃苷HPV16-E7/E7 protein(Human papillomavirus type 16)  人類乳頭狀瘤病16抗原TRP1/gp75  酪氨酶相關(guān)蛋白1抗體
轉(zhuǎn)基因玉米品系5307核酸檢測(cè)試劑盒Zopiclone　佐匹克隆(標(biāo)準(zhǔn)品)　質(zhì)量規(guī)格：>98%(T),BR

Aniracetam　阿尼西坦，回拉西坦;茴拉西坦　質(zhì)量規(guī)格：>98%(T),BR

Aniracetam　阿尼西坦(標(biāo)準(zhǔn)品)　質(zhì)量規(guī)格：>98%(T),標(biāo)準(zhǔn)品

L-Glutamine　L-谷氨酰胺　質(zhì)量規(guī)格：>98%(T),標(biāo)準(zhǔn)品

Roflumilast　羅氟司特　質(zhì)量規(guī)格：>98%(T),進(jìn)口原裝

Roflumilast　羅氟司特(標(biāo)準(zhǔn)品)　質(zhì)量規(guī)格：>98%(TLC),BR

Adenosinetriphosphate　5'-三磷腺苷(ATP)　質(zhì)量規(guī)格：>98%(滴定)

Brinzolamide　布林佐胺　質(zhì)量規(guī)格：>98%,10mg/ml,進(jìn)分

Brinzolamide　布林佐胺(標(biāo)準(zhǔn)品)　質(zhì)量規(guī)格：>98%,5-HT2A高效選擇性激動(dòng)劑

Ronidazole　羅硝唑　質(zhì)量規(guī)格：>98%,ALK抑制劑

Ronidazole　羅硝唑(標(biāo)準(zhǔn)品)　質(zhì)量規(guī)格：>98%,ALK抑制劑

Ethylcellulose　乙基纖維素　質(zhì)量規(guī)格：>98%,AMPK選擇性抑制劑

VitaminK1　維生素K1　質(zhì)量規(guī)格：>98%,AR

9-Amino-minocyclineHCl　9-氨基米諾環(huán)素鹽鹽　質(zhì)量規(guī)格：>98%,AR

Afatinib/BIBW2992　阿法替尼　質(zhì)量規(guī)格：>98%,AR
PCR的反應(yīng)條件：
因擴(kuò)增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴(kuò)增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴(kuò)增片段的大小，設(shè)定25～30個(gè)循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會(huì)出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預(yù)備實(shí)驗(yàn)可2℃間隔進(jìn)行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進(jìn)行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時(shí)，每kbp大體可設(shè)定30秒～1分鐘；當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時(shí), 時(shí)間設(shè)定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時(shí)會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時(shí)，容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外，Extension時(shí)間太短時(shí)，會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物或者會(huì)有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時(shí)間太長時(shí)，會(huì)出現(xiàn)Smear。