GSK-3α/β抑制劑(CHIR-99021)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10269

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：GSK-3α/β抑制劑(CHIR-99021)

英文名稱：CHIR-99021

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X10269

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：CHIR-99021

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

CHIR-99021是一種GSK-3α/β抑制劑，IC50為10nM/6.7nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：252917-06-9

別名：CT99021

純度：99.92%

分子量：465.34

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

枯草芽孢桿菌干擾alpha/beta 受體1蛋白抗體Human RNF151 鳥(niǎo)類催乳(PRL/LTH)免疫試劑盒

犁頭霉屬干擾gamma受體1蛋白抗體Human RNF125 鳥(niǎo)H5N1 IgG抗體ELSIA 試劑盒

枯草芽孢桿菌真核翻譯起始因子3亞基L蛋白抗體Human RNF133 獼猴骨特異性堿性磷B(ALP-B)免疫試劑盒

黑曲霉干擾誘導(dǎo)的三角形四肽重復(fù)蛋白2抗體Human RNF135 家蠶卵黃蛋白(LT)免疫試劑盒

賴芽胞桿菌屬干擾誘導(dǎo)的三角形四肽重復(fù)蛋白1B抗體Human RNF167 鯽魚(yú)卵黃蛋白原(VTG)免疫試劑盒

棉盤孢160kDa內(nèi)含子結(jié)合蛋白抗體Human RNF150 核黃轉(zhuǎn)運(yùn)因子3(RFT3)免疫試劑盒

蘋果黑腐皮殼Bruton酪激抑制劑蛋白抗體Human RNF168 核黃轉(zhuǎn)運(yùn)因子2(RFT2)免疫試劑盒

曲霉γ干擾誘導(dǎo)蛋白IP30抗體Human RNF212 核黃轉(zhuǎn)運(yùn)因子1(RFT1)免疫試劑盒

擴(kuò)展青霉中間絲家族孤啡肽1蛋白抗體Human RNF17 核二磷激A(NDPK-A)免疫試劑盒

金灰青霉內(nèi)臟器官發(fā)育轉(zhuǎn)位相關(guān)蛋白NPH2抗體Human KIAA1377(Uncharacterized protein KIAA1377) 蝶蛹金小蜂卵黃蛋白原(Vtg)免疫試劑盒

裂褐層孔菌胰島受體β抗體Human RNF10 大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coli P)免疫試劑盒

茯苓內(nèi)皮凝集HL1抗體Human RND3 Zeranol(玉赤霉)免疫試劑盒

閃光須霉干擾α抗體Human RLBP1L2 Trenbolone(侖諾)免疫試劑盒

曲霉白介-17F抗體Human RLBP1 Sulphaquinoxaline(磺喹噁林)免疫試劑盒

谷棒桿菌白介6抗體(N端)Human RLIM Sulphamethazine(磺二甲嘧啶)免疫試劑盒

香草蘭根疾白介6抗體Human RMI1 Sulphadiazine(磺嘧啶)免疫試劑盒

谷棒桿菌Corynebacterium│glutamicum 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品膽紅

埃及枝頂孢Acremonium│egyptiacum 質(zhì)量規(guī)格：>75.0%(GC)根皮

直德氏霉Drechslera│directa 質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)蟾靈
GSK-3α/β抑制劑(CHIR-99021)黑腐皮殼 8-甲氧基-2-甲基喹啉屋塵螨變應(yīng)原Derp1 IgG抗體

衛(wèi)矛擬盤多毛孢 2-氨基-5-溴-4-甲基噻唑C-C趨化因子6

細(xì)鏈格孢 4-乙炔基甲酯肌漿;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣ATP

蘋果鏈格孢 2-溴-3-(2-乙基己基)噻吩腦啡肽

小青霉 1,4-二氧六環(huán)-2-酮凝集

雙孢蘑菇 3-氟-4-溴-苯乙酮酪蛋白激2

大腸埃希 4-乙炔基苯RGD三肽

青色鏈霉 1-嘧啶2--4-羧癌標(biāo)志物-CA153

褐疣柄牛肝 2,4-二-5-氟苯屋塵螨變應(yīng)原Derp1 IgE抗體

枯草芽孢桿 3-甲氧基烯甲酯泛樣修飾因子激活1

新城疫病 3'-苯酮胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白5

黑曲霉 3-氨基-3-(3,4-二甲氧基苯基)IV型前膠原

裂褶 3-溴-4-甲氧基苯甲20S蛋白體

木拉克酵母屬 (S)-1-氨基-3--2-鹽鹽CD200分子

雞痘病叔丁基磺酰過(guò)氧化4
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)