p38抑制劑(SB-366791)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X11031

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱(chēng)：p38抑制劑(SB-366791)

英文名稱(chēng)：SB-366791

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X11031

產(chǎn)品介紹:

SCIO-469是p38選擇性的ATP競(jìng)爭(zhēng)抑制劑，IC50值是9nM.

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：472981-92-3

純度：98.01%

分子量：287.74

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

魚(yú)肉總孔雀石綠、結(jié)晶紫Pseudomonas corrugata大鼠抗凝血Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)

小孔菌屬Staphylococcus warneri大鼠神經(jīng)肽Y(NP-Y)

氧化黃色桿菌Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis大鼠神經(jīng)肽Y(NP-Y)

蠟狀芽孢桿菌Pseudomonas corrugata大鼠生長(zhǎng)激釋放多肽(GHRP)

繩狀籃狀菌Lactobacillus rhamnosus大鼠生長(zhǎng)激釋放多肽(GHRP)

巨孢毛霉Lactobacillus fermentum大鼠凝溶膠蛋白(Gelsolin)

檸檬綠木霉Enterococcus faecalis大鼠凝溶膠蛋白(Gelsolin)

尖孢鐮孢Leuconostoc lactis大鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)

果生鏈核盤(pán)菌Leuconostoc mesenteroides subsp. mesenteroides大鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)

尖鐮孢Enterococcus faecium大鼠血栓前體蛋白(TpP)

大腸埃希氏桿菌Enterococcus cecorum大鼠血栓前體蛋白(TpP)

鏈格孢Enterococcus hirae大鼠抑制B(INH-B)

靈芝Leuconostoc mesenteroides subsp. dextranicum大鼠抑制B(INH-B)

釀酒酵母Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis大鼠胰島受體β(ISR-β)

枯草芽孢桿菌Halorubrum saccharovorum大鼠胰島受體β(ISR-β)

意大利青霉Haloferax mediterranei大鼠糖化血紅蛋白A1c(A1c)

突觸抗體/突觸相關(guān)蛋白-1肺形側(cè)耳(秀珍菇)低密度脂蛋白膽固(LDL-C)比色法測(cè)試盒(雙試劑直接法)

分泌抗體離褶傘植物抗逆性植物抗逆性植物抗逆性植物抗逆性植物抗逆性

子宮內(nèi)膜抗體白鬼傘植物類(lèi)黃比色法測(cè)試盒

碳?xì)溻c協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4-A4抗體叢生地星植物總比色法測(cè)試盒
p38抑制劑(SB-366791)漢遜德巴利酵母寶藿V

焦曲霉二氫大豆

枯草芽孢桿續(xù)斷A

茯苓表戈辛O

葫蘆細(xì)基格孢 6-基異麥冬黃烷酮A

紙細(xì)基格孢焦地黃苯乙甙B1

假單胞苞菊甙

Parablastomonas 蘆薈新甙D

枯草芽孢桿羅漢松樹(shù)脂-4'-O-β-龍膽二糖

地尿芽孢桿硫天仙子水合物

根瘤 5,7,4'-三羥基-8-甲基二氫黃酮

枯草芽孢桿偏諾皂元

嗜鞣管囊酵母偽原皂Pa

路德類(lèi)酵母原皂Pa

灰樹(shù)花1 6-甲氧基-7-0-beta-D-吡喃葡萄糖
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)