實時熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。

PCR技術(shù)的定量原理：
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擴增曲線
在Real-time qPCR中，對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應(yīng)的進行，監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴增早期，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，最終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進入“平臺期”。在該時期，擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。
服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于液中。
PCR檢測試劑盒：
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min，EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20ºC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
④靶基因的特異性與保守性。
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 人腎透明癌；LoMet-ccRCC MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 人肝癌；EHBC-512 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Leptographium lundbergii Lagerberg et Melin名稱: 人肝癌；CSQT-2 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Micromonospora inyonensis Kroppenstedt et a ..名稱: 甲基丙胺單抗；Met-1 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 雜交瘤；WL-3C2 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 雜交瘤；A3C RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

freeze-dried名稱: 雜交瘤；SCRV-G-1B2 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Finegoldia magna (Prevot) Murdoch and Shah名稱: 單抗；THC10A RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Hyphozyma variabilis de Hoog名稱: 雜交瘤；S-66-5 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

freeze-dried名稱: 雜交瘤；IIC4 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Thermoascus aegyptiacus Ueda et Udagawa名稱: 雜交瘤；1B8 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Chaetomium elatum Kunze et Schmidt : Fries, ..名稱: 雜交瘤；A8 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Marasmius pulcherripes Peck名稱: 雜交瘤；S-71-9 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 雜交瘤；S-163-6 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Homo sapiens, human名稱: 豬腎傳代；PK15-B1 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Kluyvera intermedia (Izard et al. 1980) Pav ..名稱: 雜交瘤；HTK RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
西部馬腦炎病毒核酸檢測試劑盒豬潑尼松龍(Prednisolone)ELISA試劑盒ProGRPELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人反狀腺原氨(rT3)ELISA試劑盒PRSSELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人復(fù)合前列腺特異性抗原(CPSA)ELISA試劑盒PS-2ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人抗胰島素受體抗體(AIRA)ELISA試劑盒PSAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人總前列腺特異抗原(tPSA)ELISA試劑盒PSAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人重酒石去甲腎上腺素(NE-B)ELISA試劑盒PSAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人生長激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA試劑盒PSAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人β內(nèi)啡肽受體(β-EPR)ELISA試劑盒PSAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。