參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：蠟樣芽胞桿菌核酸檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：48T   0.1PCR管
產(chǎn)品貨號：FS-P10770
產(chǎn)品分類：熒光探針法
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。
產(chǎn)品特點：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
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實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內(nèi)標和引物，內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗di高辛或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。
 -1597℃冰箱凍結；真空冷凍干燥

腸炎沙門氏菌培養(yǎng)基: CM00511,9,12　g,m提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no生長條件: 37℃ -80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法

枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基: CM0003模式菌株: no石楠葉提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 35-37℃ 真空冷凍干燥法

 F575模式菌株: no安全等級: 1種屬: Penicillium│sp.土壤提供形式: 凍干物培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25℃

 Z249致病菌檢測芯片模式菌株: no種屬: Staphylococcus│simulans提供形式: 斜面培養(yǎng)物；凍干物；凍結物安全等級: 2培養(yǎng)基: 2生長條件: 37℃

ATCC8180=BCRC11036=CCUG50753=CIP69.3=DSM20427=KCTC1305=LMG21671=LMG4047=NBRC14135=NRRLB-24233模式菌株模式菌株: yes種屬: Microbacterium│lacticum提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 2生長條件: 30℃

鏈霉菌屬菌種藥用植物內(nèi)生菌模式菌株: no蒲公英組織提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0027生長條件: 28C

 -1598℃冰箱凍結；真空冷凍干燥

枯草芽孢桿菌生長條件: 35-37℃培養(yǎng)基: CM0003提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 真空冷凍干燥法

地衣芽孢桿菌培養(yǎng)基: 0002模式菌株: no曲藥提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 37℃ 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

大腸埃希氏菌培養(yǎng)基: 33基因工程常用菌提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 37℃ -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法

球色單隔孢屬生長條件: 25-28培養(yǎng)基: 14提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no 定期移植法

大腸埃希氏菌生長條件: 37℃培養(yǎng)基: 2提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 真空冷凍干燥法

桔橙小單胞菌培養(yǎng)基: 12生物活性微生物/抗腫瘤活性沉積物/深海沉積物提供形式: 凍干物模式菌株: no生長條件: 28℃ 液氮超低溫凍結法；-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法

 -1599℃冰箱凍結；真空冷凍干燥

鐮孢屬菌種藥用植物內(nèi)生菌模式菌株: no葫蘆茶植物組織提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0138生長條件: 28C

喜樹堿（標準品）PAX9(Paired box gene 9)  配對盒基因9抗原THAP1  核凋亡因子THAP1抗體

卡那替尼P-cadherin(placental)  P-鈣粘附分子抗原TH/T-H glycoprotein  TH糖蛋白抗體

卡培他濱LI-cadherin(liver-intestine cadherin)  肝腸鈣粘連蛋白抗原TGM3  轉谷氨酰酶3抗體

卡培他濱（標準品）PDCD4(programmed cell death 4)  凋亡相關蛋白4抗原TGM2/TG2/Transglutaminase 2  谷氨酰胺轉胺酶2抗體

硫卷曲霉素TFAR19(TF-1 cell apoptsis-related gene 19)  凋亡相關蛋白TFAR19抗原TGFβ1  轉化生長因子β1抗體

硫卷曲霉素(標準品)PCNA(phosphos Dyr211)peptide  磷化增殖核多肽抗原TGFB4/LEFTY2  轉化生長因子β4抗體

卡立普多PCX/PODXL(Podocalyxin)  足特異蛋白抗原TGF Beta R3  轉移生長因子β受體3抗體（TGF-βRⅢ）

卡立普多（標準品）PDGF-BB peptide  血小板源性生長因子-BB抗原TGF beta R2/TGFBR2  轉移生長因子β受體2抗體（TGF-βRⅡ）

卡維地洛Pdx1(pancreatic and duodenal homeobox 1)  胰十二指腸同源異型盒基因抗原TGF Beta R1/TGFBR1  轉移生長因子β受體1抗體（TGF-βRⅠ）

卡維地洛（標準品）pectinesterase inhibitor 18 peptide  果膠酶抗原TGF beta 3 propeptide  轉移生長因子β3抗體
蠟樣芽胞桿菌核酸檢測試劑盒Brimonidine　莫尼定　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Asulam　磺草靈　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Asulam　磺草靈(標準品)　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Bepotastinebesilate　磺貝托司汀　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Sodiumcopperchlorophyllin　葉綠素銅鈉鹽　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Neochlorogenicacid　新綠原(標準品)　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

IvabradineHCl　鹽伊伐布雷定　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Xanthophyll　葉黃素;二羥基-d-胡蘿卜素　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Xanthophyll　葉黃素;二羥基-d-胡蘿卜素　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Xanthophyll　葉黃素;二羥基-d-胡蘿卜素(標準品)　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Ticagrelor　替卡格雷　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Ticagrelor　替卡格雷(標準品)　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

RamosetronHCl　鹽雷莫司瓊　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

SevelamerHCl　鹽司維拉姆　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Sevelamercarbonate　碳司維拉姆　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
PCR的反應條件：
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴增片段的大小，設定25～30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設定30秒～1分鐘；當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時，容易發(fā)生非特異性反應。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時間太長時，會出現(xiàn)Smear。