Cdc42抑制劑(ML141)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10682

中文名稱：Cdc42抑制劑(ML141)

英文名稱：ML141

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10682

產(chǎn)品介紹:

ML141是Cdc42高效選擇性抑制劑，IC50值為200nM，對其他Rho GTPase家族成員作用力弱。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：71203-35-5

別名：CID-2950007

純度：99.51%

分子量：407.49

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

麥根腐平臍蠕孢腺單磷活化蛋白激β1抗原Anti-ATP5D Antibody癌調(diào)蛋白(OCM)

淡紫擬青霉基質(zhì)金屬蛋白-1Anti-ATP5F1D Antibody癌胚抗原相關(guān)粘附分子8(CEACAM8)

慶笙紅球菌基質(zhì)金屬蛋白-2(多肽抗原)Anti-ATP5MC2 Antibody癌胚抗原相關(guān)粘附分子7(CEACAM7)

絲狀鏈霉菌基質(zhì)金屬蛋白-3(抗原)Anti-ATP5MC3 Antibody癌胚抗原相關(guān)粘附分子6(CEACAM6)

枯草芽孢桿菌基質(zhì)金屬蛋白-7(抗原)Anti-ATP5MF Antibody癌胚抗原相關(guān)粘附分子1(CEACAM1)

琉球曲霉金屬基質(zhì)蛋白-14Anti-ATP5ME Antibody癌胚抗原(CEA)

松針散斑殼GDNF家族受體α-1（抗原）Anti-ATP5MGL Antibody癌抗原1(CAGE1)

產(chǎn)黃青霉血管緊張II抗原Anti-ATP6V0D1 Antibody癌/抗原62(CTAG62)

ATCC 14025葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白2（抗原）Anti-ATP6V1C2 Antibody癌/抗原2(CTAG2)

密黃紅菇心鈉肽（心鈉）抗原Anti-ATP6V1H Antibody阿片肽(OP)

輝光柄菇*GDNF家族受體α-4（抗原）Anti-ATP6V1B1 Antibody阿洛利敏感鈉離子通道蛋白1γ(SCNN1γ)

普通裂褶菌生長激釋放激（因子）（抗原）Anti-ATP5PB Antibody阿洛利敏感鈉離子通道蛋白1β(SCNN1β)

多主殼菌血管位蛋白樣1/血管生成樣蛋白-1抗原Anti-ATP5MPL Antibody阿洛利敏感鈉離子通道蛋白1α(SCNN1α)

鏈孢囊菌葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白4（抗原）Anti-ATP6V1H Antibodyτ-微管蛋白激2(tTBK2)

小孢根霉胃泌抑制肽（抗原）Anti-ATPAF2 Antibodyτ-蛋白激1(τPK1)

Rudaea血管位蛋白樣2/血管生成樣蛋白-2（多肽）Anti-ATR Antibodyδ樣蛋白4(δLL4)

蛋白質(zhì)磷2調(diào)節(jié)亞基5C/PP2A-B56-γ抗體托木爾假單胞菌人前列腺癌細(xì)胞

蛋白質(zhì)磷2調(diào)節(jié)亞基5D/PP2A-B56-δ抗體食芽孢桿菌小鼠纖維肉瘤細(xì)胞

細(xì)胞膜調(diào)控蛋白Paralemmin1抗體Burkholderiaxenovorans小鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞

泌乳受體抗體Phenylobacteriummuchangponense中國倉鼠卵巢細(xì)胞亞株
Cdc42抑制劑(ML141)新月彎孢霉* 3-巰基異酯肌鈣蛋白T

豬丹絲 4-吡啶鹽鹽肌間線蛋白

藍色犁頭霉 N-(2-乙基)乙酰布病

Nocardioides salarius 1,2,3,4-四-O-乙?；?β-D-葡萄糖甲酯傳染性胸膜肺炎

纖維單胞屬 (S)-(-)-2-甲酯μ-鈣激活

澳大利亞莢孢腔 2-氨基-5-甲基噻唑口蹄疫A型

樟疫霉 (+/-)-兒茶精細(xì)粒棘球絳蟲抗體

聚生殼 4-氨基對三聯(lián)苯三磷磷脂酰肌

凍土毛霉 5-噻吩-2-甲1,4,5-三磷肌

香蕉 3,5-雙(三氟甲基)磷脂酰肌二磷

釀酒酵母溴乙酰二甲縮α-乳白蛋白

干草寒冷桿 2-甲基喹喔啉β內(nèi)酰

啤酒酵母 2,5-二苯基-1,3,4-惡二唑脂肪合成

栗疫 5-氨基-4-甲酰咪唑鹽鹽胃蛋白

盤孢 2-甲氧基苯硫抑制A

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