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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞組織染色>> 甲基綠-派洛寧染色液(MGP染色液)
貨號(hào) | FS-X9769 |
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中文名稱:甲基綠-派洛寧染色液(MGP染色液)
英文名稱:Methyl Green-Pyronin Staining Solution
產(chǎn)品規(guī)格:100ml
貨號(hào):FS-X9769
產(chǎn)品介紹:
本染色液是一種組織或細(xì)胞染色時(shí)常用的可以把細(xì)胞核染成綠色或藍(lán)綠色,把細(xì)胞漿和細(xì)胞核中的核仁染成紅色的染色液。甲基綠可以和細(xì)胞核中的DNA結(jié)合,從而產(chǎn)生細(xì)胞核染色;而派洛寧可以和細(xì)胞漿或核仁中的RNA結(jié)合,從而可以使細(xì)胞漿和核仁被染色。改進(jìn)了染色液配制方法,不含很多甲基綠-派洛寧染色液中使用的劇毒甲醇。本染色液可以和免疫熒光染色或免疫組化染色配合使用。一方面可以在本甲基綠-派洛寧染色液染色后進(jìn)行免疫熒光染色或其它染料的染色,另一方面也可以在免疫組化染色后再進(jìn)行甲基綠-派洛寧復(fù)染。一個(gè)包裝的本染色液至少可以染色200個(gè)樣品。 注意事項(xiàng): 1. 需自備4%多聚、70%乙醇和95%乙醇。如果需要脫水、透明和封片處理,還需自備二甲苯,中性樹(shù)膠或其它封片劑。如果樣品是石蠟切片,需自備90%乙醇,無(wú)水乙醇以及二甲苯。 2第一次使用本試劑盒時(shí)建議先取1-2個(gè)樣品做預(yù)實(shí)驗(yàn)。 儲(chǔ)存條件:室溫避光,有效期一年。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
死亡關(guān)聯(lián)蛋白激3(DAPK3)英文名:DAPK3 電壓依賴性鈣通道CACNA1G+CACNA1H抗體包裝5MG
死亡關(guān)聯(lián)蛋白激1(DAPK1)英文名:DAPK1 鈣結(jié)合蛋白1抗體包裝1g
斯鈣1(STC1)英文名:STC1 神經(jīng)型一氧化氮合成結(jié)合蛋白抗體包裝25g
絲切蛋白1(CFL1)英文名:CFL1 蕈堿型乙酰受體M4抗體包裝5g
絲裂原激活蛋白激激激激5(MAP4K5)英文名:MAP4K5 鈣/鈣調(diào)依賴蛋白激2α抗體包裝25g
絲聚蛋白(FLG)英文名:FLG 周期蛋白結(jié)合蛋白抗體包裝5g
絲棕櫚酰轉(zhuǎn)移長(zhǎng)鏈堿性亞基1(SPTLC1)英文名:SPTLC1 分裂周期蛋白2抗體包裝10MG
絲蛋白1(PRSS1)英文名:PRSS1 分裂周期調(diào)控蛋白45抗體包裝5mg
雙調(diào)蛋白(AREG)英文名:AREG 染色體相關(guān)蛋白H抗體包裝1g
雙特異性磷5(DUSP5)英文名:DUSP5 中心體蛋白質(zhì)76抗體包裝5g
雙特異性磷1(DUSP1)英文名:DUSP1 中心體蛋白152抗體包裝2g
雙特異性酪磷化調(diào)節(jié)激1A(DYRK1A)英文名:DYRK1A 酪蛋白激1γ2/casein kinase Iγ1抗體包裝500mg
雙糖鏈蛋白聚糖(BGN)英文名:BGN 唇裂和腭裂相關(guān)跨膜蛋白1抗體包裝1g
雙腎上腺皮質(zhì)激樣激1(DCLK1)英文名:DCLK1 趨化樣因子超家族成員8抗體包裝250mg
雙腎上腺皮質(zhì)激(DCX)英文名:DCX 趨化樣因子超家族成員1抗體包裝1g
耶納農(nóng)球菌Agrococcus│jenensis 質(zhì)量規(guī)格:>500U/mg,BR自然抗性相關(guān)巨噬蛋白1試劑盒竹紅菌;hypocrellin A
節(jié)桿菌Arthrobacter│sp. 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定轉(zhuǎn)鐵蛋白受體試劑盒紫萁;Osmundacetone
蛹蟲(chóng)草Cordyceps│militaris 質(zhì)量規(guī)格:純度>99%,BR轉(zhuǎn)錄中介因子1-β試劑盒藏紅花;Potassium 7-Hyd
甲基綠-派洛寧染色液(MGP染色液)副干酪乳桿 氨基磺鈉?;囸I
Bacillus aryabhattai N-苯甲?;?L-精線粒體呼吸鏈復(fù)合物
白鱗馬勃 4-乙基苯磺酰線粒體呼吸鏈復(fù)合物III
抗生鏈霉 N-三苯甲基咪唑線粒體呼吸鏈復(fù)合物IV
燕麥鐮孢 四氟硝酰陽(yáng)離子線粒體融合2
木賊鐮孢 N-Cbz-4-甲甲酯腺三磷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體G1
空氣近藤氏酵母 4-羥基-6-三氟甲基嘧啶腺三磷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體G2
玫瑰黃鏈霉 三化釕三水合物腺環(huán)化
運(yùn)動(dòng)節(jié)桿 4-溴-2-苯甲腺環(huán)化1
靈芝 N-(2-氨基乙基)-4-嗎啉甲酰草鹽腺環(huán)化3
厭鹽假諾卡氏 2,2,4,6,7-五甲基二氫苯并呋喃-5-磺酰腺脫氨
大腸埃希 1,2,4,5-四溴消退D1
異常畢赤酵母 2-(7-甲氧基萘-1-基)乙消退E1
蘇云金芽孢桿松球亞種 1,3二甲基戊鹽鹽消退E2
大腸埃希氏 1,3-苯并惡唑-6-羧心肌肌鈣蛋白Ⅰ
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