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上海撫生實業(yè)有限公司
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寨卡病毒核酸檢測試劑盒

參  考  價面議
具體成交價以合同協(xié)議為準

產品型號50T

品       牌其他品牌

廠商性質經銷商

所  在  地上海市

更新時間:2021-05-08 10:37:29瀏覽次數(shù):137次

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寨卡病毒核酸檢測試劑盒保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

參數(shù)規(guī)格:
產品名稱:寨卡病毒核酸檢測試劑盒
產品規(guī)格:50T
產品貨號:FS-P9976
產品分類:熒光PCR法
產品運輸:低溫運輸
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
產品特點:
本產品就是根據保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟 
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
實時熒光定量PCR:
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據標準曲線獲得定量結果。因此,實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的:
1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進入真正的指數(shù)擴增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,重現(xiàn)性*定量方法,已得到的*,廣泛用于基因表達研究、轉基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
定量PCR方法:
a、競爭法
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內切酶消化PCR產物,競爭性模板的產物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產物分開,分別測定熒光強度,根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物,內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內標也被擴增。在PCR產物中,由于內標與靶模板的長度不同,二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內標為對照定量待檢測模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物,擴增產物被固相板上特異的探針所結合,再加入抗di高辛或生物素酶標抗體-辣根過氧化物酶結合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內標,作出標準曲線,也可實現(xiàn)定量檢測目的。
Corynebacterium hydrocarbooxydans Minato et ..名稱: 人Ph+急淋白血病系;SUP-B15 IMDM:Iscove'sModiefiedDulbecco'sMedium優(yōu)質胎牛血清,20%

freeze-dried名稱: 人套淋巴瘤;JeKo-1 RPMI1640(w/oHepes)優(yōu)質胎牛血清,20%

Agaricus bitorquis (Quelet) Saccardo, teleo ..名稱: 人肺癌;Calu-1 McCoy's5AMedia(ModifiedwithTricine)優(yōu)質胎牛血清,10%

Homo sapiens, human名稱: 人小肺癌;NCI-H446 RPMI1640(w/oHepes)優(yōu)質胎牛血清,10%

Kazachstania telluris (van der Walt) Kurtzm ..名稱: 人肺腺癌;NCI-H1975 RPMI1640(w/oHepes)優(yōu)質胎牛血清,10%

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 人絨毛膜癌;JEG-3 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)優(yōu)質胎牛血清,10%

Saccharomycopsis capsularis Schionning, tel ..名稱: 人內膜癌;RL95-2 DMEM/F12(1:1):Ham'sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)優(yōu)質胎牛血清,10%;0.005mg/ml胰島素

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 人腎腺癌;ACHN MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)優(yōu)質胎牛血清,10%

Ampelomyces ulicis (Adams) Rudakov名稱: 人紅白血?。籏asumi-1 RPMI1640(w/oHepes)優(yōu)質胎牛血清,20%

Cryptococcus albidus (Saito) Skinner, anamo ..名稱: 人神經母瘤;SK-N-BE(2) MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)優(yōu)質胎牛血清,10%

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 人胰腺癌系;SW1990 L15:LeibovitzMedium優(yōu)質胎牛血清,10%

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 人大肺癌;NCI-H460[H460] RPMI1640(w/oHepes)優(yōu)質胎牛血清,10%

Capnodium sp.名稱: 人T淋巴白血??;HuT78 RPMI1640(w/oHepes)優(yōu)質胎牛血清,20%

Bjerkandera adusta (Wildenow : Fries) Karst ..名稱: 人急性單核白血病單核;AML-193 IMDM:Iscove'sModiefiedDulbecco'sMedium優(yōu)質胎牛血清,5%;0.005mg/mlinsulin,0.005mg/mltransferrin和5ng/mlGM-CSF

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 人結直腸癌肺轉移;T84 DMEM/F12(1:1):Ham'sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)優(yōu)質胎牛血清,5%

Paenibacillus polymyxa bacteriophage A名稱: 人結直腸腺癌;NCI-H716[H716] RPMI1640(w/oHepes)優(yōu)質胎牛血清,10%
寨卡病毒核酸檢測試劑盒人生長激素釋放多肽(GHRP)ELISA試劑盒poly-IgRELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。

人生長抑素(SS)ELISA試劑盒PONELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。

人脫氫表雄(DHEA)ELISA試劑盒PorcineCortisolELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。

人脫氫表雄S7(DHEA-S7)ELISA試劑盒PorcinelisteriolysinELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。

人性激素結合球蛋白(SHBG)ELISA試劑盒PorcinePrednisoloneELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。

人抑制素A(INH-A)ELISA試劑盒PPAR-αELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。

人甲狀腺過氧化物酶(TPO)ELISA試劑盒PPAR-αELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。

5羥色胺(5-HT)ELISA試劑盒PPAR-αELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
PCR的反應條件:
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據模板DNA的量以及擴增片段的大小,設定25~30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少,擴增量不足;如果循環(huán)次數(shù)太多,則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時,每kbp大體可設定30秒~1分鐘;當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常,Anneal溫度太高,有時會得不到擴增產物;Anneal溫度太低時,容易發(fā)生非特異性反應。另外,Extension時間太短時,會得不到擴增產物或者會有一些短的非特異性產物優(yōu)成;而Extension時間太長時,會出現(xiàn)Smear。

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