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貨號 | FS-X10830 |
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產品介紹:
Crizotinib hydrochloride是一種有效的c-Met/ALK抑制劑,細胞實驗中IC50分別為11nM,24nM 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:1415560-69-8 別名:PF-02341066 hydrochloride 純度:99.86% 分子量:486.8 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
中文名稱:c-Met/ALK抑制劑
英文名稱:Crizotinib hydrochloride
產品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg
貨號:FS-X10830
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
立枯絲核菌大鼠B淋巴瘤因子2Anti-OXR1 Antibody人β內酰(β-lactamase)
污黑腐皮殼大鼠CXC趨化因子受體3Anti-ORC1 Antibody人β內酰(β-lactamase)
棘孢小單孢菌小鼠腫瘤壞死因子βAnti-OSR2 Antibody人β甘露糖(β Manase)
Arenibacter sp.人食欲/阿立新BAnti-OVOL1 Antibody人β甘露糖(β Manase)
灰平鏈霉菌小鼠Ⅳ型膠原Anti-P2RY11 Antibody人β半乳糖(βGAL)
孢囊放線菌大鼠中性粒彈性蛋白Anti-P2RY13 Antibody人β半乳糖(βGAL)
立枯絲核菌人促睡眠肽Anti-P2RY4 Antibody人αL艾杜糖(IDUA)
PET-22b人6-羥多巴Anti-P2RY14 Antibody人αL艾杜糖(IDUA)
依利諾斯類芽胞桿菌小鼠己糖激Anti-P2RY8 Antibody人αL艾杜糖(IDUA)
枯草芽孢桿菌大鼠腫瘤特異生長因子/腫瘤相關因子Anti-P4HB Antibody人αL艾杜糖(IDUA)
宇佐美曲霉小鼠脫氫E1Anti-p90 RSK1 Antibody人α2抗纖溶(α2-AP)
新型隱球酵母原變種大鼠羥脯Anti-PACRG Antibody人α2抗纖溶(α2-AP)
金黃桿菌屬人心納Anti-PABPC5 Antibody人N-乙酰-β-D-基葡萄糖(NAG)
榛色假單胞菌小鼠糖原合成激Anti-PABPC3 Antibody人N-乙酰-β-D-基葡萄糖(NAG)
地衣芽胞桿菌大鼠骨保護配體Anti-PACS1 Antibody人L解(PAL)
小孢根霉華變種人神經髓鞘蛋白Anti-PAK2 Antibody人L解(PAL)
RAS家族關聯(lián)結構域蛋白6抗體#牛肝菌屬人小氣道上皮細胞
Ras樣蛋白A抗體楊褐盤二孢多芽管轉化型人臍靜脈內皮細胞*培養(yǎng)基:(原代細胞)
Rh血型C抗原抗體松色二孢鼠神經母細胞瘤細胞
環(huán)指蛋白11抗體盤多毛孢菌小鼠輔助性T細胞
c-Met/ALK抑制劑膠孢 肉湯培養(yǎng)基Dβ干擾
塞氏檸檬桿 增肉湯培養(yǎng)基E瘟病抗體
金色毛殼 瓊脂培養(yǎng)基F低密度脂蛋白
青霉 肉湯培養(yǎng)基G胰島
稻生黃單胞 瓊脂培養(yǎng)基H甲型肝炎1型病
大麗花輪枝孢(棉花黃萎病) 乳糖-雙岐桿鑒定漿膜炎抗體
飲料 胭脂紅、檸檬黃、日落黃 松三糖-雙岐桿鑒定禽呼腸孤病抗體
釀酒酵母 棉子糖-雙岐桿鑒定新城疫中強核
佛羅里達紅曲霉 山梨-雙岐桿鑒定白介4
產氣腸桿 N,N-二乙基-2-甲基-1,4-苯白介
浸麻類芽孢桿 2-氨基-5-吡啶Ⅱ型膠原
Pseudomonas defluvii 雙(4-溴苯基)分泌型球蛋白A
醋醅類芽孢桿 叔戊基苯含黃單氧化3
新月彎孢 3-乙?;溅霉?半胱合成
銹赤蠟黃鏈霉 (s)-(+)-α-甲氧基-α-(三氟甲基)苯乙酰肌肽
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