參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：輪狀病毒RNA核酸檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：48T
產(chǎn)品貨號：FS-P10779
產(chǎn)品分類：恒溫熒光法
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。
產(chǎn)品特點：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
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實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內(nèi)標和引物，內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結(jié)合，再加入抗di高辛或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。
高盧蜜環(huán)菌培養(yǎng)基: 72模式菌株: no蒙古櫟提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1生長條件: 24 定期移植法

 -1620℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

節(jié)桿菌在以MM培養(yǎng)基中，能降解對硝基酚95%以上。模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 0033生長條件: 30℃

牛葡萄球菌用于科研模式菌株: no患病奶牛提供形式: 凍干物安全等級: 2培養(yǎng)基: 335生長條件: 37

彎頸霉菌屬菌種抗恥垢分枝桿菌模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0014生長條件: 28C

鮑曼不動桿菌培養(yǎng)基: CM0051模式菌株: no痰提供形式: 凍干物安全等級: 2生長條件: 36℃ -80℃冰箱凍結(jié)法

減蛋綜合征病研究模式菌株: no病雞提供形式: 凍結(jié)物安全等級: 2培養(yǎng)基: 0生長條件: 37

ATCC8042=DSM20238=NCIB6990Assay of panthenol, amino acid and dexpanthenol；?/td>模式菌株: no種屬: Pediococcus│acidilactici提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 0006生長條件: 30℃

 -1621℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

CCM4981模式菌株: yes安全等級: 1種屬: Citricoccus│muralismedieval wall painting提供形式: 凍干物模式菌株培養(yǎng)基: 0221

皺褶青霉培養(yǎng)基: 0013模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 25℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

蘇云金芽胞桿菌培養(yǎng)基: 0033模式菌株: no土壤樣品提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1生長條件: 20℃ -80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法；礦物油法

詹氏丙桿菌產(chǎn)丙,釀酒、降酯用。模式菌株: no窖泥提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0286生長條件: 30℃

芽胞桿菌培養(yǎng)基: 471近海細菌水樣/上層海水提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no生長條件: 28℃ 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

白地霉生長條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 0013提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 真空冷凍干燥法；礦物油法

 -1622℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

氟胞嘧啶/5-氟胞嘧啶（標準品）MAP1A/Mtap1a(microtubule associated protein 1A)  微管相關蛋白1A抗原Syndecan 4  多配體聚糖4抗體

氟比洛芬(國產(chǎn))TBX2/T-box2(T-box Protein 2)  新型抑癌基因(多肽)Syndecan 2/heparin sulphate protoglycans 1  硫肝素糖蛋白1抗體抗體

氟比洛芬(進口)TCF7L2(transcription factor 7-like 2)  轉(zhuǎn)錄因子7類似物2抗原Syncytin 1/HERV  合胞素1抗體

氟比洛芬（標準品）TDP-43/TARDBP (tar DNA binding protein)  Tar DNA 結(jié)合蛋白43抗原SynCAM/TSLC1  肺癌腫瘤阻抑基因1抗體

磷霉素鈣（水溶）Tenascin  固生蛋白抗原SynCAM  粘附分子1抗體

磷霉素鈉TEM 1/CD248(Tumor endothelial marker 1 precursor)  內(nèi)涎蛋白/內(nèi)皮唾液蛋白抗原SYNC/Syncoilin  微管卷曲蛋白SYNC抗體

加替沙星TFF3 (trefoil factor3)  三葉肽因子3(多肽)SynaptotagminVI  突觸蛋白6抗體

加替沙星（標準品）TFPI-2 (tissue factor pathway inhibitor-2)  組織因子途徑抑制劑-2抗原Synaptotagmin-4  突觸結(jié)合蛋白4抗體

吉非替尼TIEG1/KLF10(TGF-beta inducible early response gene 1)  TGF-β誘導早期應答基因1抗原synaptotagmin-2  突觸結(jié)合蛋白相關基因2抗體

吉非替尼(標準品)TGF- BetaR1/ALK (TGF-beta receptor type I)  轉(zhuǎn)移生長因子–β受體1抗原Synaptotagmin 5  突觸結(jié)合蛋白5抗體
輪狀病毒RNA核酸檢測試劑盒Isoliquiritigenin　異甘草素（標準品）　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

GinsenosideRe　人參皂苷Re(標準品)　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

GinsenosideF4　人參皂苷F4,人參皂苷Rg4　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

GinsenosideRK3　人參皂苷RK3(標準品)　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

GinsenosideRH4　人參皂苷RH4　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

JujubosideB1　棗仁皂苷B1(標準品)　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

ProsapogeninA　薯蕷次皂苷A　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

ACY1215　Rocilinostat(ACY-1215)　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Myristicacid　肉豆蔻,十四(標準品)　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Myristicacid　肉豆蔻,十四　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Dimethylglyoxime　丁二肟(鎳試劑)　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Flavone　黃　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Ivermectin　依維菌素　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

CFDASE;Carboxyfluoresceindiacetate,succinimidylester　細胞增殖示蹤熒光探針(CFDASE)　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

CAPE(CaffeicAcidPhenethylester)　CAPE(咖啡乙酯)　質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
PCR的反應條件：
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴增片段的大小，設定25～30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設定30秒～1分鐘；當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時，容易發(fā)生非特異性反應。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時間太長時，會出現(xiàn)Smear。