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貨號(hào)	FS-X10517

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：BRD4抑制劑(ARV-825)

英文名稱：ARV-825

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

貨號(hào)：FS-X10517

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：ARV-825

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

ARV-825是一種PROTAC類的BRD4抑制劑。ARV-825對(duì)BRD4的BD1和BD2結(jié)構(gòu)域具有高親和力，Kds值分別為90和28nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：1818885-28-7

純度：99.35%

分子式：C??H??ClN?O?S

分子量：923.43

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

茶樹菇轉(zhuǎn)錄因子Tbx3抗體Anti-IFNG Antibody透明質(zhì)合3(HAS3)

斑玉蕈tinagl1抗體Anti-IFNG Antibody透明質(zhì)合2(HAS2)

三線鐮刀菌辣椒受體5抗體Anti-IFNG Antibody透明質(zhì)合1(HAS1)

糊精乳桿菌腫瘤排斥抗原gp96 1 變異體抗體Anti-IFNG Antibody透明質(zhì)基葡糖4(HYAL4)

野生金針菇(白色)組織因子途徑抑制劑抗體Anti-IFNG/IFN-γ Antibody透明質(zhì)基葡糖3(HYAL3)

中華根瘤菌星形瘤高表達(dá)蛋白抗體（環(huán)指蛋白100）Anti-IFNGR1 Antibody透明質(zhì)基葡糖2(HYAL2)

根瘤菌微管蛋白β5抗體Anti-IFT88 Antibody透明質(zhì)基葡糖1(HYAL1)

黑曲霉轉(zhuǎn)錄中介因子Tif1α抗體Anti-IFNGR2 Antibody頭蛋白(NOG)

大腸埃希菌轉(zhuǎn)錄中介因子Tif1β抗體Anti-IFNGR1 Antibody戊二脫氫(OGDH)

威林格氏線黑粉菌磷化轉(zhuǎn)錄中介因子Tif1β抗體Anti-IGF1 Antibody戊二受體1(OXGR1)

釀酒酵母非受體酪蛋白激2抗體Anti-IGF1R Antibody銅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(COPT2)

串珠鐮刀菌*轉(zhuǎn)錄中介因子Tif1γ抗體Anti-IGF1R Antibody銅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(COPT1)

毛殼調(diào)節(jié)染色體組裝激1抗體Anti-IGF1 Antibody銅離子轉(zhuǎn)運(yùn)ATPβ肽(ATP7β)

莖點(diǎn)霉屬翻譯控制腫瘤蛋白抗體Anti-IGF2(IGF-2) Antibody銅藍(lán)蛋白(CP)

漸綠木霉腫瘤/抗原20抗體Anti-IGF2-AS Antibody銅伴侶超氧化物歧化(SOD4)

棒狀桿菌屬線粒體內(nèi)膜轉(zhuǎn)位抗體Anti-IGF2R Antibody同種異體移植炎癥因子1(AIF1)

5-羥色胺受體5A抗體豬霍亂沙門氏菌小鼠小腸平滑肌細(xì)胞

5-羥色胺受體7抗體立枯絲核菌（斜面）小鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞

5-羥色胺受體6抗體分枝桿菌屬小鼠食管上皮細(xì)胞

ATP依賴解旋SMARCA2抗體動(dòng)物雙歧桿菌乳亞種小鼠小腸粘膜上皮細(xì)胞
BRD4抑制劑(ARV-825)大腸埃希 Fmoc-D-4-苯鉤端螺旋體IgM抗體

Acinetobacter bereziniae Nemec et al. (S,S)-DACH-萘基 Trost 配體柯薩奇病A16IgG抗體

黑木耳硫化鈣胰島原

釀酒酵母 2-溴-5-(三氟甲氧基)糖化血紅蛋白A1c

近綠曲霉雙(二苯基膦苯基)二化鈀(II)糖化蛋白

青色鏈霉乙酰丁酯血糖

香菇 2-異丁脊髓灰質(zhì)炎病IgG抗體

耐冷冷桿蘇丹橙G肌鈣蛋白I

扣囊復(fù)膜孢酵母正已酐補(bǔ)體蛋白5

淡紫擬青霉十氫喹啉（順式+反式）2,5寡腺合成

牛奶類芽胞桿十聯(lián)苯2,5寡腺合成1

藍(lán)色小單孢 3-氨基-4-吡啶1,25-二羥基維生D3

灰樹花 2,2-二羥基偶氮苯角蛋白18

側(cè)耳木霉二異基磷化氫α平滑肌肌動(dòng)蛋白

梨形毛霉 Fmoc-Lys(Ddiv)-OH甲狀腺結(jié)合球蛋白β
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)