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貨號(hào)	FS-X10449

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：FAK抑制劑(PND-1186)

英文名稱：PND-1186

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X10449

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：PND-1186

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

PND-1186可逆地抑制FAK活性，IC50為1.5nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：1061353-68-1

別名：SR-2516;VS-4718

純度：99.71%

分子量：501.5

結(jié)構(gòu)式：

PND-1186結(jié)構(gòu)式

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

大腸埃希菌G蛋白偶聯(lián)受體p2y12抗體Anti-CFP Antibody淀粉樣前體蛋白(APP)

糙皮側(cè)耳G蛋白偶聯(lián)受體p2y8抗體Anti-CHAT Antibody次級(jí)淋巴組織趨化因子6Ckine(CCL21)

黑曲霉G蛋白偶聯(lián)受體p2y9抗體Anti-CGRPR(CALCRL) Antibody成纖維生長因子9(FGF9)

松球殼孢菌蛋白酪磷相互作用蛋白51抗體Anti-CHAT Antibody成纖維生長因子23(FGF-23)

黑根霉菌內(nèi)皮纖溶原激活抑制蛋白1抗體Anti-CHAT Antibody成纖維生長因子23(FGF23)

盤長孢狀盤孢前列腺相關(guān)P抗原家族成員1抗體Anti-CHAT Antibody層粘連蛋白(Laminin)

香蕉生假絲酵母磷化酪抗體Anti-CHAT Antibody層連蛋白(Laminin)

果生鏈核盤菌豬藍(lán)耳病病M蛋白抗體Anti-CHD2 Antibody表皮生長因子受體2(sp185/Her2)

長谷川赤擔(dān)孢酵母橋粒斑菲蛋白1抗體Anti-CHD2 Antibody表皮生長因子受體2(Her2)

地錘菌屬突觸樣蛋白1抗體Anti-CHEK2 Antibody表皮生長因子受體(EGFR/ErbB1)

紅曲霉蛋白調(diào)解因子6抗體Anti-CHEK1 Antibody表皮生長因子受體(EGF-R)

樟疫霉神經(jīng)叢蛋白B3抗體Anti-CHGA Antibody表皮生長因子受體(EGFR)

阿舒假囊酵母PHD指蛋白21A抗體Anti-CHEK2 Antibody半乳糖凝集3(Galectin-3)

鏈球菌(不定種)富含脯蛋白11抗體Anti-CHI3L1 Antibody半乳凝3(GAL-3)

枯草芽孢桿菌三磷腺受體受體P2X3抗體Anti-CHEK2 Antibody(PB0732)半乳凝3(GAL3)

異常威克漢姆酵母相關(guān)血漿蛋白A抗體Anti-CHM Antibody白介8(IL-8)

鏈霉菌屬菌種Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：0.98

費(fèi)氏中華根瘤菌Sinorhizobium│fredii 質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR

嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌Stenotrophomonas│maltophilia 質(zhì)量規(guī)格：>99%,二肽肽-4(DPP-4)抑制劑
FAK抑制劑(PND-1186)非洲哈茨木霉 4-氟葡萄糖氧化

奇異變形 2-氟-4-羥基苯甲敏感性脂肪

鹽城海桿二(2,6,10-十二碳三烯-1,12-二基)釕(IV)脂蛋白酯

半軟干酪居真細(xì) 1,5-環(huán)辛二烯(六氟乙酰酮)(I)銥肝脂

大腸埃希氏桿 4-氟苯基苯乙酮強(qiáng)啡肽

灰黃青霉 5-溴異喹啉血管緊張轉(zhuǎn)換抑制劑

枯草芽孢桿甲基烯二環(huán)戊基酯脂肪β氧化

雞油 2-三氟甲基喹啉二?；视王；D(zhuǎn)移

冠突曲霉 1-[3-(trifluoromethoxy)phenyl]ethanol硫角質(zhì)

環(huán)狀芽孢桿 5-羥基-1-茚酮鳥核交換因子4

葡萄座腔 (R)-(-)-3-甲基-2-丁鳥核交換因子4

多粘類芽孢桿 2,2′-聯(lián)嘧啶肥大β類胰蛋白

蘇云金芽孢桿 4-溴苯甲砜Rhodes激

枯草芽孢桿 2-(4-溴苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶線粒體呼吸鏈復(fù)合物IV

果生鏈核盤 2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯甲線粒體呼吸鏈復(fù)合物V
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)