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貨號	FS-X10802

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：PI3Kγ抑制劑(AS-605240)

英文名稱：AS-605240

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10802

產(chǎn)品介紹:

AS-605240是一種有效的特異性PI3Kγ抑制劑，IC50值為8nM，Ki值為7.8nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：648450-29-7

純度：98.0%

分子量：257.27

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

嗜糖土地芽孢桿菌人胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子Anti-N4BP2L2 Antibody人preptin

耐寒短桿菌小鼠血管緊張轉(zhuǎn)化Anti-NAB2 Antibody人preptin

植物維生AAnti-NACAD Antibody人過氧化物體增殖物激活受體α(PPAR-α)

HIV假病 GX24.8植物維生EAnti-NANOGP8 Antibody人過氧化物體增殖物激活受體α(PPAR-α)

耐久腸球菌小鼠血管緊張ⅡAnti-NAXE Antibody人載脂蛋白E(Apo-E)

聚生殼菌大鼠血管緊張Ⅱ轉(zhuǎn)化Anti-NANOGP8 Antibody人載脂蛋白E(Apo-E)

棒形孢擬盤多毛孢兔內(nèi)皮型一氧化氮合成Anti-NBEAL1 Antibody人成骨生長肽(OGP)

慢生根瘤菌人神經(jīng)粘附分子配體1Anti-NBPF12 Antibody人成骨生長肽(OGP)

枯草芽孢桿菌植物維生D2Anti-NBPF5P Antibody人破骨分化因子(ODF)

猴假單胞菌人神經(jīng)保護(hù)因子Anti-NBR1 Antibody人破骨分化因子(ODF)

Aestuariispira insulae小鼠角化內(nèi)分泌因子/雙調(diào)蛋白Anti-NBPF5P Antibody人羥基膠原吡啶交聯(lián)(OH-PYD)

假單胞菌兔尿激型纖溶原激活物受體Anti-NBPF7 Antibody人羥基膠原吡啶交聯(lián)(OH-PYD)

相思根瘤菌大鼠血管緊張Ⅰ轉(zhuǎn)化Anti-NCAPG Antibody人脫氧膠原吡啶交聯(lián)(DPD)

泡囊短波單胞菌兔尿激型纖溶原激活物Anti-NCAPH Antibody人脫氧膠原吡啶交聯(lián)(DPD)

小孢根霉華變種植物維生D3Anti-NCAPG2 Antibody人膠原吡啶交聯(lián)(PYD)

根瘤菌小鼠活化AAnti-NCBP1 Antibody人膠原吡啶交聯(lián)(PYD)

環(huán)指蛋白74抗體重組激活基因1蘇云金芽孢桿菌莫里遜亞種小鼠臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞

重組激活基因2蛋白抗體蘇云金芽孢桿菌玉螟亞種非何杰金氏淋巴瘤細(xì)胞

環(huán)指蛋白75抗體蘇云金芽孢桿菌巴基斯坦亞種人喉癌上皮細(xì)胞

RIT1蛋白抗體蘇云金芽孢桿菌勵木亞種小鼠淋巴瘤細(xì)胞(NK靶細(xì)胞)
PI3Kγ抑制劑(AS-605240)佛雷德里克斯堡假單胞 3%NaCl堿性蛋白胨水膠質(zhì)系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子

糙皮側(cè)耳 GN增液絨毛膜促性腺β

淡紫擬青霉鹽胱增液SC巨噬集落激因子

泡盛曲霉 3,5-二甲基-1-苯白介3

孢青霉含225mL胰酪胨大豆多粘肉湯均質(zhì)袋環(huán)瓜肽

禽腺病Ⅴ型 L型細(xì)高滲鹽增培養(yǎng)基抗角蛋白抗體

紫花鏈霉檢定培養(yǎng)基血肌酐

禾谷絲核種芽孢培養(yǎng)基沉默調(diào)節(jié)蛋白1

黑曲霉細(xì)保存培養(yǎng)基血管擴張激磷蛋白

Naumannella? (S)-(+)-香芹酮蛋白C

鐮刀 6.5%NaCl葡萄糖瓊脂維生A

麥根腐平臍蠕孢乳成套生化鑒定管番茄紅

大腸埃希硫慶大霉可溶性糖蛋白130

云芝 4,6-二甲基-2-巰基嘧啶過氧化物體增殖物激活受體γ輔激活子1α

樟疫霉含青霉TSA培養(yǎng)基平板天門冬氨基轉(zhuǎn)移
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)