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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
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PERK抑制劑(GSK2606414)

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產(chǎn)品型號(hào)

品       牌其他品牌

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所  在  地上海市

更新時(shí)間:2022-05-18 11:47:50瀏覽次數(shù):171次

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貨號(hào) FS-X10348
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RNF148/FITC 熒光標(biāo)記環(huán)指蛋白148抗體IgGN-叔丁氧羰-S-三苯-L-半胱氨 99%
ROCK1 /FITC 熒光標(biāo)記Rho相關(guān)蛋白激1抗體IgG叔丁氧羰-L-賴氨 98%
ROCK2/FITC 熒光標(biāo)記Rho相關(guān)蛋白激2抗體IgGN-

中文名稱:PERK抑制劑(GSK2606414)

英文名稱:GSK2606414

產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

貨號(hào):FS-X10348

產(chǎn)品介紹:

英文名稱:GSK2606414

產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

GSK2606414是一種具有選擇性的PERK抑制劑,IC50值為0.4nM。

注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途!

號(hào):1337531-36-8

純度:99.18%

分子量:451.44

儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);

4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

短密青霉肌球蛋白輕鏈激抗體Human PICP(C-terminal propeptide of Collagen alpha-1(I) chain) 磷化乙酰(PaCoA)

大腸埃希氏桿菌MYCBPAP抗體Human IMPA2(Inositol monophosphatase 2) 磷化腺活化蛋白激(pAMPK)

香菇組織相容性復(fù)合體蛋白1抗體Human CARTPT(Cocaine-and amphetamine-regulated transcript protein) 磷化腺活化蛋白激(AMPK)

擴(kuò)散炭層菌線粒體核糖體蛋白S22抗體Human COL1A1(Collagen Type I Alpha 1) 磷化外信號(hào)調(diào)節(jié)激(pERK)

毛栓孔菌棕櫚酰化膜蛋白7抗體Human PTTG2(Securin-2) 磷化糖原合激3β(pGSK3B)

泡囊短波單胞菌小鼠抗單克抗體Human COL2A1(Collagen alpha-1(II) chain) 磷化糖原合成激3(pGSK-3)

乳乳球菌乳亞種肌球蛋白輕鏈1/3抗體Human PTTG1IP(Pituitary tumor-transforming gene 1 protein-interacting protein) 磷化肌球蛋白輕鏈(PMLC)

葡萄座腔菌屬磷化肌球蛋白輕鏈抗體Human NUSAP1(Nucleolar and spindle-associated protein 1) 磷化核因子κB抑制蛋白α(pIKBα)

大腸埃希菌肌肉特異性泛蛋白連接1抗體Human OxLDL(Oxidized low-density lipoprotein) 磷化蛋白激C(P-PKC)

產(chǎn)氣列契瓦尼爾氏菌泛蛋白連接抗體Human PIIINP(N-terminal propeptide of Collagen alpha-1(III) chain) 磷化蛋白激B(P-PKB)

大腸埃希菌單羧轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體Human MYOCD(Myocardin) 磷化cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白1(pCREB1)

芬尼青霉可溶性蘋(píng)果脫氫抗體Human NRN1(Neuritin) 磷甘油變位2(PGAM2)

云芝栓孔菌(變色栓菌)蛋白激C亞性D型抗體Human MITF(Microphthalmia-associated transcription factor) 淋巴趨化因子(Lptn/LTN/XCL1)

枝孢屬磷化µ-型阿片受體抗體Human LMAN2(Vesicular integral-membrane protein VIP36) 淋巴抗原6復(fù)合物基因座A(Ly6a)

鏈霉菌磷化絲裂原活化蛋白激激1/2抗體Human MDH2(Malate dehydrogenase, mitochondrial) 淋巴功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)

釀酒酵母基質(zhì)金屬蛋白9抗體Human MMP17(Matrix metalloproteinase-17) 淋巴功能相關(guān)抗原2(LFA-2/CD2)

美澳型核果褐腐病菌Monilinia│fructicola (G. Winter) Honey 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR鹽甜菜堿

淡紫擬青霉(新引種)Paecilomyces lilacinus 質(zhì)量規(guī)格:粘度100000mPa.s甜菜堿

: SK1023/61資源名稱: 坎德拉沙門(mén)氏菌 質(zhì)量規(guī)格:4000mPa.s,BR鼠李糖
PERK抑制劑(GSK2606414)竹喙球 2-硝基乙降鈣基因相關(guān)肽

枯草芽胞桿 (S)-1-叔丁氧羰基-3-氨基降鈣受體

產(chǎn)黃青霉 巴豆酰降鈣受體樣受體

黑蔥花霉 (-)二異松蒎基烷降鈣原

蘇云金芽孢桿 3-戊烯-2-酮膠原Ⅲ

棘孢曲霉 甲酰肼膠原I

金龜子綠僵 2--3-三氟膠原II

香菇 D-葡萄庚糖膠質(zhì)系來(lái)源的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子

Talaromyces macrosporus 4-正基乙炔角蛋白15

大腸埃希氏 乙乙酯角化生長(zhǎng)因子

香菇 2-甲基-2-戊烯結(jié)締組織生長(zhǎng)因子

葡萄座腔 O-甲基-L-酪結(jié)構(gòu)型一氧化氮合

毛柄(金針菇) 4-乙苯結(jié)合珠蛋白

白假絲酵母 4-乙氧基睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子

紅曲霉 甲基-PEG4-NHS酯解偶聯(lián)蛋白1

 


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