當前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>核酸檢測試劑盒>>熒光PCR法>> 50T寨卡病毒和基孔肯雅病毒核酸檢測試劑盒
服務流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數據分析——結果交付——售后服務。
產品名稱 | 分類 | 貨號 |
寨卡病毒和基孔肯雅病毒核酸檢測試劑盒 | 熒光PCR法 | FS-P10008 |
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
PCR技術的定量原理:
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擴增曲線
在Real-time qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化,此時即為基線期。
PCR反應過程中產生的DNA拷貝數是呈指數形式增加的,隨著反應循環(huán)數的增加,最終PCR反應不再以指數形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產物已不再呈指數級的增加,PCR的終產物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據最終的PCR產物量不能計算出初始模板量。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于液中。
實時熒光定量PCR是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。主要服務:DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hanse ..名稱: 外周血淋巴;8E5 10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 人胚腎;293T DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS,2mML-glutamine,1%Penicillin/Streptomycin.
Homo sapiens, human名稱: 人肺鱗癌;SK-MES-1 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Trichophyton yaoundei Cochet et Doby-Dubois ..名稱: 人非小肺癌;NCI-H1299 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Ceriporia spissa (Schweinitz : Fries) Rajch ..名稱: 人外周血慢性髓性白血??;KU812E RPMI1640(w/oHepes)20%FBS
Colletotrichum malvarum (Braun et Caspari) ..名稱: 人肺腺癌;Calu-3 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 人自然殺傷;NK-92 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
frozen名稱: 人胰腺上皮樣癌;PANC-1 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
Capnocytophaga sp.名稱: 人胰腺癌;MIAPaCa-2 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
Clostridium sp.名稱: 人原胚腎轉化;Trex-293 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS+Blasticidin
frozen名稱: 人肝癌;PLC/PRF/5 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Cochliobolus sativus (Ito et Kuribayashi) D ..名稱: 人肺腺癌;NCI-H441 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 人脛骨肉瘤;U-2OS McCoy's5AMedia(ModifiedwithTricine)10%FBS
Homo sapiens, human名稱: 人舌鱗狀癌;CAL27 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
Mus musculus (B cell); Mus musculus (myeloma ..名稱: 人骨肉瘤;HOS MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Homo sapiens, human名稱: 人胰腺腫瘤;AsPC-1 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
寨卡病毒和基孔肯雅病毒核酸檢測試劑盒人布魯氏菌抗體IgG(BrucellaAbIgG)ELISA試劑盒SLCELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
人囊蟲病抗體(CYTAb)ELISA試劑盒SLEELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
人白喉抗體(DiphtheriaAb)ELISA試劑盒sLRELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
人阿米巴(Amebiasis)ELISA試劑盒sLRELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
人鉤端螺旋體IgG(Lebtospira)ELISA試劑盒sLRELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
人鉤端螺旋體IgM(Lebtospira)ELISA試劑盒smActinin-αELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
人破傷風抗體(TetanusAb)ELISA試劑盒smActinin-αELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
人旋毛蟲抗體(TrichinellaAb)ELISA試劑盒smActinin-αELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
PCR檢測試劑盒:
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中,按100g:3ml的比例加入Trizol試劑,嚴格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進行。
(1)加Trizol(按3ml/100mg組織,寧多勿少)置于玻璃勻漿器中勻漿后,冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中,4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中,室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol,振蕩15s,室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細吸取上層水相,移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol,振搖,置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min,EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清,紙巾吸干,加入75%乙醇1ml,振搖,充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇,空氣干燥10min(可離心加快干燥,盡量吸盡離心液體)。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中(可吹打混勻),-20ºC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度,所有標本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳,顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
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