實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

PCR技術(shù)的定量原理：
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擴(kuò)增曲線
在Real-time qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，最終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線性關(guān)系，所以根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于液中。
PCR檢測(cè)試劑盒：
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)的流程進(jìn)行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細(xì)吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min，EP管底部可見(jiàn)白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時(shí)將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20ºC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
Colletotrichum indicum Dastur, anamorph名稱: 人肝癌；Hep3B2.1-7 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Desulfosporosinus orientis (Campbell and Po ..名稱: 人臍靜脈融合；EA.hy926 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 人肝母瘤；HuH-6 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Staphylococcus aureus subsp.aureus Rosen ..名稱: 人非小肺癌；HCC827 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Blastomyces dermatitidis Gilchrist et Stokes名稱: 小鼠顱蓋成纖維；OP9 α－MEM：AlphaMinimumEssentialMedium(withNucleosides)10%FBS

Podoxyphium indicum Sharma et al.名稱: 人胃癌；NCI-N87[N87] RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Candida boidinii Ramirez, anamorph名稱: 人胃腺癌；AGS RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Polysphondylium asymetricum Vadell et Caven ..名稱: 人肺腺癌；NCI-H1395 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Achlya bisexualis Coker名稱: 人喉癌；LCC RPMI1640(w/oHepes)15%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 人胃癌；MKN-28 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Chaetomium trilaterale Chivers var.trilat ..名稱: 人內(nèi)膜低分化腺癌；EAG3 DMEM/F12(1:1):Ham'sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)10%FBS

Candida albicans (Robin) Berkhout名稱: 人結(jié)直腸腺癌長(zhǎng)春新耐藥株；HCT-8/V RPMI1640(w/oHepes)10%FBS+2000ng/ml長(zhǎng)春新

Klebsiella pneumoniae名稱: 小鼠肺成纖維樣；C57/B6-L DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS

Homo sapiens, human名稱: 小鼠皮膚成纖維樣；C57/B6-S DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 人內(nèi)膜異位癥患者在位內(nèi)膜間質(zhì)永生化；hEM15A DMEM/F12(1:1):Ham'sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)15%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: SV40轉(zhuǎn)染人成骨；hFOB1.19 DMEM/F12(1:1):Ham'sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)10%FBS+300ng/mlG418
廣州管圓線蟲(chóng)核酸檢測(cè)試劑盒人輪狀病(RV)IgMELISA試劑盒sICAM-1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人腺病IgG(ADV-IgG)ELISA試劑盒sICAM-1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人腺病IgM(ADV-IgM)ELISA試劑盒sICAM-1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人流感病抗體IgG(FLU)ELISA試劑盒sICAM-1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人登革熱抗體(DF-Ab)ELISA試劑盒sICAM-1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人利什曼原蟲(chóng)抗體(LeishimariaAb)ELISA試劑盒sICAM-1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人EB病IgG(EBvIgG)ELISA試劑盒sICAM-1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人EB病IgA(EBvIgA)ELISA試劑盒sIgAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。