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貨號(hào)	FS-X9777

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：溶酶體紅色熒光探針

英文名稱：Lysosome Tracker Red

產(chǎn)品規(guī)格：50μl

貨號(hào)：FS-X9777

產(chǎn)品介紹:

本探針一種溶酶體紅色熒光探針，可以用于活細(xì)胞溶酶體特異性熒光染色。

本探針為采用Molecular Probes公司的DND 99進(jìn)行了熒光標(biāo)記的帶有弱堿性的熒光探針，可以選擇性地滯留在偏酸性的溶酶體中，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)于溶酶體的特異性熒光標(biāo)記。中性紅(Neutral Red)和橙(Acridine Orange)也都可以對(duì)溶酶體進(jìn)行熒光染色，但中性紅和橙的染色缺乏特異性。

本探針呈紅色熒光，檢測(cè)時(shí)的大激發(fā)波長(zhǎng)為577nm，大發(fā)射波長(zhǎng)為590nm。按照1:20000的比例稀釋，可以配制1000ml探針工作液。

儲(chǔ)存條件：-20℃避光，有效期6個(gè)月。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

輕肽鐵蛋白(FTL)英文名：FTL 1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框220抗體包裝5g

輕肽神經(jīng)絲蛋白(NEFL)英文名：NEFL 鈣磷蛋白1抗體包裝1g

親環(huán)B(CYPB)英文名：CYPB 鈣磷蛋白2抗體包裝25mg

親環(huán)A(CYPA)英文名：CYPA 磷化通道相互作用蛋白3抗體包裝1g

鞘磷脂(SPH)英文名：SPH 16號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框61抗體包裝250mg

鞘1磷酯受體1(S1PR1)英文名：S1PR1 視錐感光環(huán)磷鳥門控通道蛋白CNG3抗體包裝5g

鞘1磷酯裂解1(SGPL1)英文名：SGPL1 環(huán)核門控陽(yáng)離子通道蛋白β3/CNG-β3抗體包裝1g

橋粒芯膠粘蛋白1(DSC1)英文名：DSC1 非受體酪激c-Abl抗體包裝100MG

強(qiáng)啡肽(Dyn)英文名：Dyn 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白152抗體包裝100MG

前腦啡肽(PENK)英文名：PENK 甘油二酯磷轉(zhuǎn)移抗體包裝25mg

前列腺性磷(ACP3)英文名：ACP3 嗜鉻粒B抗體包裝1g

前列腺E受體2(EP2)英文名：EP2 血管加壓激活鈣啟動(dòng)受體蛋白1抗體包裝5g

前列腺E合2(PTGES2)英文名：PTGES2 色P450Ⅱj3抗體包裝1g

前膠原C端蛋白增強(qiáng)子1(PCPE1)英文名：PCPE1 鈣激活離子通道4抗體包裝250mg

前動(dòng)力蛋白受體1(PKR1)英文名：PKR1 周期依賴性激6抗體包裝5g

炭疽芽胞桿菌Bacillus│anthracis 質(zhì)量規(guī)格：> 98%,合物標(biāo)準(zhǔn)品腫瘤壞死因子相關(guān)激活誘導(dǎo)因子試劑盒紫草;Lithosprmoside

拘櫞桿菌Citrobacter│sp. 質(zhì)量規(guī)格：純度> 98.5%,BR,二合物腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體受體3試劑盒豬去氧膽;Hyodeoxycholic

: F536資源名稱: 黃曲霉質(zhì)量規(guī)格：純度> 98%腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體受體2試劑盒竹節(jié)香附A;Raddeanin(Ane
溶酶體紅色熒光探針黃曲霉 2-溴-3-氟循環(huán)復(fù)合物

黃粘蓋牛肝 3-氨基-2-硝基吡啶煙酰單核轉(zhuǎn)移3

宇佐美曲霉 2-二苯基膦-6-煙酰腺二核

彎孢 1-甲氧基羰酰氨基-7-萘酚煙酰腺二核磷

雜色曲霉 N-異基-4-甲酰基苯甲酰炎癥因子3;穿透

肺形側(cè)耳乙肼氧化低密度脂蛋白

Au141（黑木耳） 1-羥基-2-萘苯酯氧化低密度脂蛋白抗體

廣食黃桿對(duì)氨基苯甲-3-磺氧化高密度脂蛋白

聚生殼 N-(三苯甲基)-L-天冬酰氧化磷脂

草假單胞乙二四乙四鈉四水化合物氧化型

松口蘑 2-苯基鈉四水合物

青榨槭葉斑病 2-氧-1-咪唑烷一氧化氮

多根硬皮馬勃羅哌鹽鹽一氧化氮合成

大腸桿 4-甲硫基衣原體抗體

葡枝根霉 4--2-胰蛋白
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)