VG染色液-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9966

中文名稱：VG染色液

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：100ml

貨號(hào)：FS-X9966

產(chǎn)品介紹:

用途：

膠原纖維染色，簡(jiǎn)稱V.G染色液

注意事項(xiàng)：

臨用時(shí)飽和PA溶液：酸性復(fù)紅=9:1混合后使用。

儲(chǔ)存條件：室溫，避光，12個(gè)月

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

香菇腫瘤轉(zhuǎn)移抑制蛋白1抗體Human CEP55 山羊骨形成蛋白2(BMP-2)免疫試劑盒

黃色短桿菌半胱蛋白蛋白-12抗體Human CD9(CD9 antigen) 山羊骨堿性磷(BALP)免疫試劑盒

三葉草根瘤菌角蛋白17抗體Human CD94 山羊骨鈣/骨谷蛋白(OT/BGP)免疫試劑盒

大腸埃希氏菌CD38抗體Human CEP63 山羊骨保護(hù)(OPG)免疫試劑盒

果生鏈核盤(pán)菌CD38抗體Human CDC25A 山羊還原(GSR)免疫試劑盒

Paracoccus碳酐1抗體Human CD32 山羊過(guò)氧化物(GSH-PX)免疫試劑盒

異常漢遜酵母碳酐2抗體Human CDC14B 山羊孤腓肽(OFQ/N)免疫試劑盒

露濕漆斑菌絲/蘇蛋白質(zhì)激抗體Human CEP68 山羊睪(T)免疫試劑盒

玫瑰色紅球菌α-連環(huán)蛋白抗體（鈣粘蛋白相關(guān)蛋白）Catenin αHuman CEP290 山羊肝脂(HL)免疫試劑盒

巨獸芽孢桿菌癌易感基因2相互作用蛋白抗體Human CD4(T-cell surface glycoprotein CD4) 山羊膽囊收縮/縮膽囊八肽(CCK-8)免疫試劑盒

肺炎鏈球菌質(zhì)連接蛋白1抗體Human CEP350 山羊催乳(PRL)免疫試劑盒

地衣芽孢桿菌盤(pán)狀結(jié)構(gòu)域受體蛋白2抗體Human CD9(CD9 antigen) 山羊催產(chǎn)(OT)免疫試劑盒

清酒假絲酵母膜糖蛋白CD200抗體Human CEP44 山羊促性腺激釋放激(GnRH)免疫試劑盒

布拉克須霉胰羧肽A1抗體Human CD81(CD81 antigen) 山羊促生長(zhǎng)激釋放激(GHRH)免疫試劑盒

干酪乳桿菌羧肽A2抗體Human CEP55 山羊促腎上腺皮質(zhì)激釋放因子(CRF)免疫試劑盒

茄鏈格孢腦源性免疫球蛋白超家族蛋白3抗體Human CD94 山羊促腎上腺皮質(zhì)激(ACTH)免疫試劑盒

副流感病毒Respirovirus│Parainfluenza virus 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRPodocin 蘿卜硫

黃海芽孢桿菌Bacillus│marisflavi 質(zhì)量規(guī)格：BRPL7抗體/抗蘇酰tRNA合成試劑盒羅丹明B

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：BRPL12抗體/抗酰tRNA合成試劑盒六氫吡啶羧
VG染色液匍枝根霉(黑根霉) 3--2-氟苯甲包柔氏螺旋體

柳松菇 5-溴-2,3-二氟苯甲MBD3

波狀曲霉 2-溴-6-氟苯甲核纖層蛋白B2

果香地霉 2--5-氟異煙發(fā)育調(diào)節(jié)GTP結(jié)合蛋白2

表皮葡萄球托麥汀N-myc下游調(diào)節(jié)基因2

孟氏假單胞 2-溴吡啶-4-甲甲酯酮脫氫E2

靈芝反-1,4-二氨基環(huán)已烷CD209分子

海南小雙孢苯二胸激1

庫(kù)德里阿茲威畢赤酵母 2,3-二溴-6-丁型肝炎IgM抗體

尖孢鐮刀胡麻?；?/span> 3-溴噻-2-羧甲酯白介36α

中慢生華癸根瘤 3--2,4-二氟苯白介36β

Ochrobactrum 2-氟-4-煙血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2

曲霉 2-正基烷-1,3-二抗肌炎抗體譜3抗體IgG

節(jié)桿屬 1-甲基-4-硝基-1H-吲唑內(nèi)皮脂肪

食砜節(jié)桿 5-甲氧基水楊酪蛋白激2

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