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當前位置：上海撫生實業(yè)有限公司>>細胞生物學試劑>>細胞組織染色>> 內質網紅色熒光探針
| 貨號 | FS-X9775 |
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產品介紹:
本探針是一種內質網紅色熒光探針，可以用于活細胞內質網特異性熒光染色。本探針為采用Molecular Probes公司的BODIPY TR進行了熒光標記的glibenclamide，分子量為915.23。 Glibenclamide即glyburide，中文名為格列苯脲，是一種2型糖尿病治療藥物，可以結合主要定位在內質網上的sulphonylurea受體。因此熒光標記的glibenclamide就可以用作內質網特異性的熒光探針。 本探針對于細胞的毒性極低。而傳統(tǒng)的DiOC6(3)對ER染色的同時也對細胞有一定的毒性。本探針呈紅色熒光，檢測時的大激發(fā)波長為587nm，大發(fā)射波長為615nm。 本探針按照后附的使用說明染色后，用等固定后染色效果可以被部分保留。本品提供了探針稀釋液，使本探針的使用更加便捷。按照1:1000的比例稀釋，可以配制20ml探針工作液；按照1:3000的比例稀釋，可以配制60ml探針工作液。 儲存條件：-20℃避光，有效期6個月。 |
中文名稱：內質網紅色熒光探針
英文名稱：Endoplasmic Reticulum Tracker Red
產品規(guī)格：20μl
貨號：FS-X9775
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
溶血?；D移3(LPCAT3)英文名：LPCAT3 貓眼綜合征染色體候選基因6抗體包裝25g
溶血?；D移2(LPCAT2)英文名：LPCAT2 21號染色體開放閱讀框2抗體包裝25mg
溶血?；D移1(LPCAT1)英文名：LPCAT1 9號染色體開放閱讀框86抗體包裝25G
溶血磷脂受體3(LPAR3)英文名：LPAR3 21號染色體開放閱讀框128抗體包裝5G
溶體性磷2(ACP2)英文名：ACP2 6號染色體開放閱讀框62抗體包裝100g
妊娠關聯血漿蛋白A(PAPPA)英文名：PAPPA CCZ1蛋白抗體包裝500g
熱休克轉錄因子4(HSF4)英文名：HSF4 腦蛋白5抗體包裝1g
熱休克轉錄因子1(HSF1)英文名：HSF1 21號染色體開放閱讀框58抗體包裝5g
熱休克蛋白β8(HSPβ8)英文名：HSPβ8 20號染色體開放閱讀框43抗體包裝1g
熱休克蛋白β6(HSPβ6)英文名：HSPβ6 9號染色體開放閱讀框43抗體包裝5g
熱休克蛋白β2(HSPβ2)英文名：HSPβ2 幾丁質3樣蛋白3抗體包裝100ml
熱休克蛋白40(HSP40)英文名：HSP40 趨化樣因子超家族成員2抗體包裝500ml
染色質裝配因子1亞基B(CHAF1B)英文名：CHAF1B 趨化樣因子超家族成員2亞型1抗體包裝1g
染色質域解旋DNA結合蛋白4(CHD4)英文名：CHD4 18號染色體開放閱讀框1抗體包裝5g
染色框同源物3(CBX3)英文名：CBX3 色c氧化VIIA亞型2抗體包裝100g
黑曲霉Aspergillus│niger 質量規(guī)格：> 95%,BR主要組織相容性復合體，II類，DQα2試劑盒知母皂E;Anemarsaponin
蜜蜂生球擬酵母Torulopsis│apicola 質量規(guī)格：HPLC>95%,標準品周期依賴性激5試劑盒知母皂元;Sarsasapogenin
乳乳球菌Lactococcus│lactis 質量規(guī)格：純度> 98%,BR，可用于培養(yǎng)周期依賴性激4試劑盒醉椒;Kavain
內質網紅色熒光探針假交替單胞 2-異基乙酰乙乙酯血清腫瘤相關物質
豬瘟病 2,3,5-三氟溴苯血清總補體
擬青霉 2-氨基異煙乙酯血栓海綿蛋白
蘇云金芽胞桿肯尼亞亞種 2-氨基煙乙酯血栓前體蛋白
四川散斑殼 N-(芐氧羰基)-1H-吡唑-1-甲脒血栓A2
柱狀田頭菇 乙異辛酯血栓B2
耐冷冷桿 乙異丁酯血栓調節(jié)蛋白
栗疫 2,4,6-基-3-環(huán)己烯-1-甲；異環(huán)檸檬血糖
梨葉殼小圓孢 代單丁基錫血纖蛋白原降解產物
熱帶假絲酵母 2，4-二-3，5-二酚血纖維蛋白溶原
節(jié)桿 N-BOC-1H-吡唑-1-甲脒血小板VASP;P2Y12
Pseudarthrobacter 3,4,5-氧基苯乙血小板第三因子
微桿 3-甲基硫代已酯血小板第四因子
釀酒酵母 普施安藍 MX-R血小板反應蛋白;凝血敏感蛋白1
深藍鐮孢 3--2-甲血小板反應蛋白4
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