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行業(yè)產(chǎn)品
當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> DT-diaphorase抑制劑(DMXAA)
貨號(hào) | FS-X10702 |
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中文名稱(chēng):DT-diaphorase抑制劑(DMXAA)
英文名稱(chēng):Vadimezan
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號(hào):FS-X10702
產(chǎn)品介紹:
DMXAA是一種競(jìng)爭(zhēng)性DT-diaphorase抑制劑,Ki值為20μM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):117570-53-3 別名:ASA-404 純度:99.19% 分子量:282.29 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
pOJ260環(huán)核陽(yáng)離子通道蛋白α2抗原Anti-CDK5 AntibodyN-乙酰轉(zhuǎn)移15(NAT15)
藍(lán)微褐鏈霉菌C型鈉尿肽抗原Anti-CDK5RAP3 AntibodyN-乙酰轉(zhuǎn)移14(NAT14)
灰黃青霉睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子抗原Anti-CDK6 AntibodyN-乙酰轉(zhuǎn)移10(NAT10)
費(fèi)氏中華根瘤菌5抗體Anti-CDK8 AntibodyN-乙酰轉(zhuǎn)移1(NAT1)
高山被孢霉抗Ⅲ型膠原抗原(Collagen Ⅲ Ⅲ型膠原)Anti-CDK9 AntibodyN-乙酰神經(jīng)酰合(NANS)
曲霉Ⅲ型膠原抗原(Collagen Ⅲ Ⅲ型膠原)Anti-CDKL1 AntibodyN-乙酰葡糖激(NAGK)
釀酒酵母IV型膠原(Collagen Ⅳ Ⅳ 型膠原)Anti-CDKL2 AntibodyN-乙酰硫酯(GAS)
聚生殼菌I型膠原蛋白Anti-CDKL4 AntibodyN-乙酰谷合(NAGS)
新城疫病Ⅴ型膠原(多肽)Anti-CDKL3 AntibodyN-乙酰β-D-基葡萄糖(NAGase)
細(xì)鏈格孢緊密連接蛋白1抗原Anti-CDKN1C AntibodyN-乙酰α-D-基葡萄糖(NAGLU)
pME6032少突膠質(zhì)跨膜蛋白抗原Anti-CDKN2B AntibodyN-酰基乙?;?NAAA)
死亡谷芽孢桿菌緊密連接蛋白1抗原(C端)Anti-CDKN1B AntibodyN-?;术K?(ASAH2)
異配囊接霉前列腺氧化環(huán)化1抗原Anti-CDKN2C AntibodyN-?;术K?(ASAH1)
嗜果刀孢肉堿棕櫚?;D(zhuǎn)移1A多肽抗原Anti-CDKN3 AntibodyN-肉豆蔻酰基轉(zhuǎn)移2(NMT2)
扣囊復(fù)膜孢酵母二氫嘧啶樣2CRMP2抗原Anti-CDX2 AntibodyN-肉豆蔻?;D(zhuǎn)移1(NMT1)
巨大芽孢桿菌降鈣受體樣蛋白抗原Anti-CDNF AntibodyN-去乙酰化/磺基轉(zhuǎn)移4(NDST4)
含脯突觸相關(guān)蛋白相互作用蛋白1抗體地衣芽孢桿菌人甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞
外周蛋白2抗體嗜熱鏈球菌小鼠血管內(nèi)皮瘤細(xì)胞
轉(zhuǎn)錄因子Pax6抗體費(fèi)氏志賀氏菌(福氏志賀氏菌)新生牛鼻甲細(xì)胞
PUM1蛋白抗體Hyphomonasadhaerens人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞,
DT-diaphorase抑制劑(DMXAA)蟲(chóng)草屬 鹽辛可寧腺病4型
鳥(niǎo)芽孢桿屬 2-氨基-5-溴吡尿
芽胞桿ATCC 9372;(曾用名:枯草芽胞桿黑色變種) 2,2,2-三乙酰β-內(nèi)啡肽
多變毛霉 磷肌激
粉紅擲孢酵母 甲氧基鹽鹽半胱蛋白1
黑曲霉 十八烷過(guò)氧化4
尖鐮孢 十八烷雌
氣單胞 2-十三烷酮肌
微紫青霉 2,6-二-4-氨基琥珀脫氫
南海桿狀 異硫丁酯膜輔蛋白
嗜熱鏈球 基膦?;阴パt
栓屬 2,4,6-基吡啶對(duì)甲苯磺鹽Q熱抗體
Winogradskyella eximia 3,5-二脫氧膽
植物乳桿 3-甲氧基苯甲腺病6型
枇杷鏈格孢 3-甲基環(huán)己酮腺病7型
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