PCR的反應(yīng)條件：
因擴增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴增片段的大小，設(shè)定25～30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預(yù)備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設(shè)定30秒～1分鐘；當溫度設(shè)定在68℃以下時, 時間設(shè)定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時，容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時間太長時，會出現(xiàn)Smear。
?
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：莫氏立克次體（RM）核酸檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品貨號：FS-P10461
產(chǎn)品分類：熒光PCR法
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。
產(chǎn)品特點：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標和引物，內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結(jié)合，再加入抗di高辛或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。
實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
蘇云金芽孢桿菌以色列亞種生長條件: 30培養(yǎng)基: 2提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no 真空冷凍干燥法；定期移植法

泡盛曲霉變種培養(yǎng)基: CM0015糖化用菌。提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 25-28℃ 真空冷凍干燥法

地衣芽孢桿菌培養(yǎng)基: CM0002產(chǎn)堿性蛋白酶。提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28℃ 真空冷凍干燥法；定期移植法

疣孢青霉生長條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 0013提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

 GIM6-b-15模式菌株: no安全等級: 1種屬: Bacillus│pumilus土壤提供形式: 凍干物纖維素酶木質(zhì)素酶產(chǎn)生菌培養(yǎng)基: 0002

 -656℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

DSM22901=CCUG51249=JCM18990=NIPH838模式菌株: yes安全等級: 2種屬: Acinetobacterbeijerinckii創(chuàng)傷病人提供形式: 凍干物分類學研究。培養(yǎng)基: CM0847;胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA）(CAIQ0701);胰蛋白胨15.0g，大豆胨5.0g，鈉5.0g，瓊脂13.0g，蒸餾水1.0L，pH7.3±0.2。

大果毛殼分解纖維素模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25-28℃

蘇云金芽孢桿菌培養(yǎng)基: 141害蟲生物防治提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28 定期移植法

 Sorex-juina血清學分型　Javanica　sorex-jaina模式菌株: no種屬: Leptospira│interrogans提供形式: 凍結(jié)物安全等級: 2培養(yǎng)基: CM0114生長條件: 37℃

優(yōu)雅食烷菌有機污染物降解菌/石油烴類降解菌模式菌株: no水樣/深層海水提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 821生長條件: 25℃

太平洋硫膨大桿菌潛在的有機污染物降解菌/分離自石油富集菌群模式菌株: no沉積物/近海沉積物提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 1001生長條件: 28℃

 -657℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

小小鏈霉菌產(chǎn)生抗枯草芽孢桿菌活性物質(zhì)模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0012生長條件: 28C

枯草芽孢桿菌用于產(chǎn)纖溶酶的研究模式菌株: no納豆提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0002生長條件: 30℃

絳紅產(chǎn)色小單孢菌培養(yǎng)基: 0012產(chǎn)生代謝產(chǎn)物具有抑菌活性提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28℃ 液氮超低溫凍結(jié)法；礦物油法；定期移植法

-4-丙烯  2-(2H-并三氮唑-2-基)對酚

3-基-5-硝基三  1,2-二乙烷  氧基酯

2-甲氧基氧基乙乙酯  (-)-檸檬烯  3,4-二甲氧基酚

2-  對甲氧基乙基酚  2-羥基-N-氧化物(HPNO)

N-Boc-D-alaninol  N-Boc-D-丙醇  106391-86-0

Chloramphenicol  霉素  56-75-7

FMOC-L-ALANINOL  N-芴甲氧羰基-L-丙醇  161529-13-1

Oxytetracycline dihydrate  土霉素  6153-64-6

大鼠抑制素βA(INHβA)ELISA試劑盒 ，英文名： INHβA ELISA Kit

Mouse immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit 小鼠免疫球蛋白G(IgG)ELISA試劑盒

MousePlatelet-DerivedGrowthFactorAB,PDGF-ABELISAkit 小鼠血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforhumandopamine,DAELISAKIT人多巴胺規(guī)格：48T/96T

ABL1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitEPO大鼠紅生成素規(guī)格：48T/96T
莫氏立克次體（RM）核酸檢測試劑盒芝麻素607-80-7中文別名：脂麻素、芝麻脂素、芝麻明  

英文名：Sesamin  

登錄號：607-80-7

分子式：C20H18O6

分子量：354.36

分子結(jié)構(gòu)：

外觀：白色結(jié)晶粉末

規(guī)格：20 mg/支

純度：≥ 98%

用途：用于含量測定/鑒定/藥理實驗等。

提取來源：脂麻科植物脂麻Sesamum indicum L. 的種子

溶解性：易溶于、乙、，微溶于、。幾乎不溶于水、性溶液和鹽。

熔點：122～123℃

旋光度：+64.5°(c=1.75，)

藥理藥效：芝麻素對流感病、仙臺病和結(jié)核桿菌有抑制作用。農(nóng)業(yè)上用作除蟲菊酯的增效劑。臨床觀察對氣管炎有一定療效。用于抗病、殺菌劑、抗氧化劑、殺蟲增效劑、治療氣管炎。

貯存條件： 4℃冷藏、密封、避光

有效期： 2年