CK1抑制劑(IC261)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X11027

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：CK1抑制劑(IC261)

英文名稱：IC261

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

貨號：FS-X11027

產(chǎn)品介紹:

IC261是一種新型CK1抑制劑,作用于細(xì)胞有絲分裂,IC261抑制CK1,IC50值為16μM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：186611-52-9

純度：98.97%

分子量：311.33

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

平菇—8804Pseudomonas stutzeri大鼠胃腸癌標(biāo)志物CA199

枯草芽孢桿菌枯草亞種Pseudomonas stutzeri大鼠血紅氧合1(HO-1)

枯草芽孢桿菌Pseudomonas stutzeri大鼠血紅氧合1(HO-1)

聚多曲霉Pseudomonas stutzeri大鼠磷脂A2(PL-A2)

黑曲霉Pseudomonas stutzeri大鼠磷脂A2(PL-A2)

香菇Pseudomonas stutzeri大鼠組織因子途徑抑制物(TFPI)

大腸埃希菌Pseudomonas stutzeri大鼠組織因子途徑抑制物(TFPI)

橘青霉Pseudomonas stutzeri大鼠水通道蛋白5(AQP-5)

波蘭青霉Pseudomonas stutzeri大鼠水通道蛋白5(AQP-5)

細(xì)孢毛霉Pseudomonas stutzeri大鼠水通道蛋白4(AQP-4)

枯草芽孢桿菌Pseudomonas stutzeri大鼠水通道蛋白4(AQP-4)

綠色木霉Pseudomonas syringae大鼠水通道蛋白3(AQP-3)

無Pseudomonas stutzeri大鼠水通道蛋白3(AQP-3)

葡萄座腔菌Pseudomonas stutzeri大鼠水通道蛋白1(AQP-1)

枯草芽孢桿菌Pseudomonas synxantha大鼠水通道蛋白1(AQP-1)

異常威克漢姆酵母Pseudomonas syringae大鼠水通道蛋白0(AQP-0)

腦質(zhì)膜單胺轉(zhuǎn)運蛋白PMAT抗體銀白離褶傘鎂(Mg)比色法測試盒

白細(xì)胞介1受體相關(guān)蛋白抗體長根菇鋅(Zn)比色法測試盒

多配體聚糖4抗體洛巴伊口蘑(金福菇)鉀離子(K)比濁法測試盒

血小板源性生長因子D脊髓源性生長因子B桃紅側(cè)耳銅(Cu)比色法測試盒
CK1抑制劑(IC261)Bacillus amyloliquefaciens subsp. plantarum 衛(wèi)矛羰堿

葡萄座腔地骨皮乙

枯草芽孢桿白麻

葡萄痂圓孢新堿

金針菇FV908 30-羥基藤黃

寡孢鏈霉 9S-alpha-羥基表藤黃

大理石奇異球 9R-alpha-羥基表藤黃

尖頭蟲草異藤黃

靈芝新藤黃

黃楊痂圓孢異新藤黃

異常威克漢姆酵母藤黃

華根霉 2alpha-羥基-3beta-乙酰白樺

釀酒酵母澤拉木

枯草芽孢桿 A

土壤類芽孢桿表沒食子兒茶3-O-(3''-O-甲基)沒食子酯
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)