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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> AMPK抑制劑
貨號(hào) | FS-X10267 |
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產(chǎn)品介紹:
英文名稱:Dorsomorphin dihydrochloride 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg Dorsomorphin dihydrochloride是一種有效的ATP競爭性的選擇性AMPK抑制劑,Ki為109±16nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):1219168-18-9 別名:BML-275 dihydrochloride;Compound C dihydrochloride 純度:99.73% 分子量:472.41 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
中文名稱:AMPK抑制劑
英文名稱:Dorsomorphin dihydrochloride
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號(hào):FS-X10267
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
雜色曲霉纖毛內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)同源蛋白46抗體Human ROGDI 蜥蜴狀腺原(T3)免疫試劑盒
無白介-10受體a抗體Human PDK1([Pyruvate dehydrogenase [lipoamide]] kinase isozyme 1, mitochondrial) 蜥蜴甲狀腺(T4)免疫試劑盒
門多薩假單胞菌白介-13受體a1抗體Human RNMTL1 蜥蜴睪(T)免疫試劑盒
鴨疫里氏桿菌免疫相關(guān)鳥三磷基因抗體Human RNPC3 蜥蜴雌二(E2)免疫試劑盒
埃里鏈格孢白介-13受體a2抗體Human RNPS1 蜥蜴25羥基膽固(25-OHC)免疫試劑盒
沃氏富鹽菌嗜粒趨化蛋白CCL1抗體Human RNPEP 蜥蜴17羥孕(17-OHP)免疫試劑盒
鮑姆木層孔菌磷化胰島樣生長因子1受體抗體Human ROBO1 鯊魚
釀酒酵母胰島降解抗體Human ROBO3 鯊魚孕激/孕(PROG)免疫試劑盒
香菇白介12抗體Human ROCK1 鯊魚狀腺原(T3)免疫試劑盒
異配囊接霉原變種白介4抗體Human PDK1([Pyruvate dehydrogenase [lipoamide]] kinase isozyme 1, mitochondrial) 鯊魚皮質(zhì)(Cortisol)免疫試劑盒
膿腫分枝桿菌胰島樣生長因子結(jié)合蛋白9抗體Human KPRP(KeRatinocyte proline-rich protein) 鯊魚甲狀腺(T4)免疫試劑盒
彎孢霉干擾-gamma受體2抗體Human RNF25 鯊魚睪(T)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌白介27受體抗體Human RNPC3 鯊魚雌二(E2)免疫試劑盒
Buttiauxella 白介-1受體拮抗劑抗體Human RNF26 其它
盔狀畢赤酵母KB抑制蛋白激γ抗體Human RNF34 新德里超級(jí)細(xì)菌金屬β-內(nèi)酰-1(NDM-1)免疫試劑盒
棲沉積物海菌磷化KB抑制蛋白激γ抗體Human RNF4 小尾寒羊增食欲(orexin)免疫試劑盒
: AJ12909FERMBP4736資源名稱: 大腸埃希氏菌 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品葫蘆巴堿鹽鹽
擬康氏木霉Trichoderma│pseudokoningii 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%槐角堿
鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,98%香紫蘇
AMPK抑制劑仁果殼小圓孢 苯并呋喃-3-弓形蟲IgM抗體
嗜熱脂肪地芽孢桿 2-氨基-3-甲氧基酪蛋白
耐寒短桿 反式-(1R,2R)-2-氨基環(huán)戊鹽鹽a膠質(zhì)系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子
黑曲霉 2,4-二-5-基嘧啶b膠質(zhì)系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子
西宮皮生球 3-甲基-1H-吲唑乙型肝炎病表面IgG抗體
阿魏側(cè)耳 3,3'-雙噻吩絡(luò)絲蛋白
枯草芽孢桿 N,1-雙(叔丁氧羰基)-L-組雙環(huán)己鹽抗神經(jīng)節(jié)脂抗體
蘇云金芽孢桿 2-甲基-5-甲氧基反神經(jīng)調(diào)節(jié)脂抗體
佛雷德里克斯堡假單胞 2-氨基嘧啶-5-羧神經(jīng)節(jié)脂
單胞屬 貝特6-磷果糖激-1
灰略紅鏈霉 甲基-4,6-O-亞芐基-Α-D-吡喃葡糖II型膠原蛋白
大腸埃希氏 3,5-二羥基苯甲酰肥大蛋白
草菇 2-氨基-3--5-26S蛋白體
禿裸鏈霉 O-乙基異脲鹽鹽嗜性粒過氧化物
Actinokineospora 2-二苯并[b,f][1,4]氧氮雜卓-11(10H)-酮Ⅱ
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