當(dāng)前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> Aurora-A激酶抑制劑(MK-5108)
貨號 | FS-X10800 |
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產(chǎn)品介紹:
MK-5108是高效和特異性的Aurora-A激酶抑制劑,IC50值為0.064nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:1010085-13-8 別名:VX-689 純度:98.0% 分子量:461.94 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
英文名稱:MK-5108
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號:FS-X10800
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
白地霉小鼠孕受體Anti-MTOR Antibody人硒蛋白1(SEP1)
海底德沃斯氏菌兔子腎上腺髓質(zhì)Anti-MUTYH Antibody人硒蛋白1(SEP1)
平田頭菇大鼠D-乳脫氫Anti-MYB Antibody人血清淀粉樣蛋白A3(SAA3)
園弧青霉=桔灰青霉人可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2Anti-MX2 Antibody人血清淀粉樣蛋白A3(SAA3)
鑲邊鏈霉菌人胸腺基質(zhì)淋巴生成Anti-MYB-A Antibody人鳥結(jié)合蛋白4(Gbp4)
泡盛曲霉變種大鼠胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子Anti-MYBPC1 Antibody人鳥結(jié)合蛋白4(Gbp4)
大腸埃希氏菌小鼠胰島樣生長因子結(jié)合蛋白6Anti-MYBPC1 Antibody人色b561(cytb561)
球孢白僵菌雙花扁豆凝集Anti-MYF5 Antibody人色b561(cytb561)
突孢毛殼兔子可溶性血管內(nèi)皮蛋白C受體Anti-MyD88 Antibody人脂質(zhì)運載蛋白2(LCN2)
淡紫擬青霉兔脂蛋白αAnti-MYH14 Antibody人脂質(zhì)運載蛋白2(LCN2)
新疆鹽地桿菌小鼠肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子Anti-MYH11 Antibody人脂肪型脂肪結(jié)合蛋白(aFABP)
根癌土壤桿菌植物鈣調(diào)Anti-MYH14 Antibody人脂肪型脂肪結(jié)合蛋白(aFABP)
膜醭畢赤酵母人穿孔/成孔蛋白Anti-MYL6 Antibody人磷脂酰肌蛋白聚糖3(GPC-3)
葡萄根瘤菌大鼠膽固Anti-MYH4 Antibody人磷脂酰肌蛋白聚糖3(GPC-3)
小腸腸球菌人多效生長因子Anti-MYL7 Antibody人葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白3(GLUT3)
青霉屬兔載脂蛋白EAnti-MYL9 Antibody人葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白3(GLUT3)
RhoGTP激活蛋白GAP抗體小白側(cè)耳大鼠肝Kupffer細(xì)胞(原代細(xì)胞)
染色體濃縮調(diào)節(jié)蛋白2抗體雙孢菇人輸尿管上皮永生化細(xì)胞
RAS相關(guān)蛋白癌基因Rab35抗體墨汁鬼傘(斜面)人低轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞
受體轉(zhuǎn)運蛋白4抗體大棕菇人惡性黑色瘤細(xì)胞
Aurora-A激酶抑制劑(MK-5108)嗜幾丁質(zhì)類芽孢桿 變形桿成套生化鑒定管(SN)葡萄糖激
潮間交替紅色桿 HB-PET自誘導(dǎo)培養(yǎng)基葡萄糖激
大腸埃希氏 葡萄糖天門冬培養(yǎng)基基質(zhì)金屬蛋白6
平田頭菇6-1 O-(基硅)羥游離甲狀腺
黑曲霉 腦心浸出液瓊脂平板白介11
彩色豆馬勃 液體硫乙鹽培養(yǎng)基管內(nèi)皮型一氧化氮合
球形芽孢桿 YPDA培養(yǎng)基誘導(dǎo)型一氧化氮合成
簇囊腐霉 哥倫比亞血瓊脂基礎(chǔ)(改良)β-乳球蛋白
廣布擬盤多毛孢 仲丁鋁基質(zhì)金屬蛋白抑制因子3
弗雷曲霉 DTM添加劑1流行性腹瀉病IgG抗體
靈芝(紅芝, 赤芝) DTM添加劑2Ⅺ
邊緣假單胞 平板計數(shù)肉湯(PCB)基質(zhì)衍生因子1α
變形桿* 霉麥芽提取物瓊脂培養(yǎng)基抗人乙肝病表面抗原IgG抗體
黑管 2-乙?;讲⑧绶郧傲邢貰
黑曲霉 麥康凱肌阿東羧卞青霉瓊脂(MZAC)牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白
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