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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
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酸性α-乙酸萘酚酯酶染色液(ANAE法)

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產(chǎn)品型號(hào)

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時(shí)間:2022-05-16 15:08:36瀏覽次數(shù):159次

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貨號(hào) FS-X10017
酸性α-乙酸萘酚酯酶染色液(ANAE法)正在熱銷的產(chǎn)品:SREBP-1 膽固調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1抗體二癸 97%
SREBP-2 膽固調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白2抗體二正己 99%
srGAP3 精神障礙相關(guān)GAP蛋白抗體癸 98%
synaptotagmin-2 突觸結(jié)合蛋白相關(guān)因2抗體N,N-二丁 98%
Synaptotagmin-4 突觸結(jié)合蛋白4抗體二正辛 97%
SPATA12 特異

產(chǎn)品介紹:

用途:

又稱非特異性酯酶染色液,可用于血液、骨髓或細(xì)胞涂片、冰凍切片的非特異性酯酶染色,亦可作抑制試驗(yàn)

注意事項(xiàng):

其原理是酸性條件下細(xì)胞中的酸性酯酶將α-乙酸萘酚水解產(chǎn)生α-萘酚,α-萘酚再與六偶氮副品紅偶聯(lián),生成不溶性紅色沉淀,定位于細(xì)胞質(zhì)。

儲(chǔ)存條件:4℃,避光,6個(gè)月

中文名稱:酸性α-乙酸萘酚酯酶染色液(ANAE法)

英文名稱:

產(chǎn)品規(guī)格:3×10ml|3×20ml

貨號(hào):FS-X10017

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);

4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

平菇胰輔脂抗體Human HCCS(Holocytochrome C Synthase) 人羥甲基戊二單酰還原(HMG-CoAR)免疫試劑盒

螺卷毛殼19號(hào)染色體開放閱讀框45抗體Human HDAC2(Histone Deacetylase 2) 人羥甲基戊二單酰(HMG-CoA)免疫試劑盒

鮮綠青霉過氧化氫誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄蛋白1抗體Human GSTα4(Glutathione S Transferase Alpha 4) 人羥基賴正己(HLNL)免疫試劑盒

釀酒酵母核因子NFκB激活蛋白1抗體Human Hepc(Hepcidin) 人羥脯(Hyp)免疫試劑盒

曲霉第12號(hào)染色體開放閱讀框23抗體Human GSK3α(Glycogen Synthase Kinase 3 Alpha) 人強(qiáng)啡肽(Dyn)免疫試劑盒

釀酒酵母γ-連環(huán)/連接蛋白γ抗體Human GSP(Glycosylated Serum Protein) 人潛伏轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β結(jié)合蛋白2(LTBP2)免疫試劑盒

日勾維腸桿菌10號(hào)染色體開放閱讀框4抗體Human GSTα1(Glutathione S Transferase Alpha 1) 人潛伏膜蛋白1(LMP-1)免疫試劑盒

中國克魯維酵母10號(hào)染色體開放閱讀框47抗體Human GPI(Glucose 6 Phosphate Isomerase) 人前心鈉肽(Pro-ANP)免疫試劑盒

黃色短桿菌10號(hào)染色體開放閱讀框81抗體Human GPR120(G Protein Coupled Receptor 120) 人前纖維蛋白1抗體免疫試劑盒

猴頭菌19號(hào)染色體開放閱讀框47抗體Human GPRC5A(G Protein Coupled Receptor, Family C, Group 5, Member A) 人前纖維蛋白1免疫試劑盒

金黃殼囊孢19號(hào)染色體開放閱讀框54抗體Human GPR37(G Protein Coupled Receptor 37) 人前鐵調(diào)(Pro-Hepc)免疫試劑盒

貝雷絲孢酵母N-乙酰半乳糖糖蛋白3、β-半乳糖轉(zhuǎn)移1抗體Human GR(Glutathione Reductase) 人前列腺性磷(PAP)免疫試劑盒

球孢白僵菌19號(hào)染色體開放閱讀框18抗體Human GIF(Gastric Intrinsic Factor) 人前列腺H2(PGH2)免疫試劑盒

總狀毛霉19號(hào)染色體開放閱讀框21抗體Human GPR120(G Protein Coupled Receptor 120) 人前列腺F2α(PGF2α)免疫試劑盒

沼澤紅假單胞菌19號(hào)染色體開放閱讀框24抗體Human GLDL(Glycated Low Density Lipoprotein) 人前列腺F(PGF)免疫試劑盒

大腸埃希氏菌Ⅱ型膠原α1蛋白/軟骨鈣抗體Human GJβ1(Gap Junction Protein Beta 1) 人前列腺E2(PGE2)免疫試劑盒

葡萄穗霉屬Stachybotrys│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRB連接蛋白試劑盒橙花

大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRB活化因子受體試劑盒長(zhǎng)梗秦艽

鏈霉菌屬菌種Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRB活化因子試劑盒常山乙
酸性α-乙酸萘酚酯酶染色液(ANAE法)巴氏醋桿巴氏亞種 苯磺副流感病1,2,3型IgM抗體

釀酒酵母 十六烷基-β-D-麥芽糖寨卡病IgM抗體

硫色小針層孔 乳環(huán)沙星環(huán)氧二十碳三烯

枯草芽孢桿 乙酰乙酰-2,4-二二羥二十碳三烯

草青霉 硫-5-羥色肌酐磷肌磷脂

香菇 尿促卵泡環(huán)氧化合物水解2

葡萄座腔 2--5-磺酰肝結(jié)節(jié)有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽8

嗜熱液化芽孢桿 5--2-氟苯甲ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白C3

金耳 碳乙烯酯NADPH氧化2

棒曲霉 Fmoc-3-(1-萘基)-L-Eya1蛋白

蓋囊菇 L-β-高亮鹽鹽皰疹病-8型感染

黑曲霉 (R)-8-(二苯基膦)-1,2,3,4-四氫萘-1-多瘤病

葡萄座腔 2-甲氧基-3-吡啶-4-酰基合成3

龜裂鏈霉 鹽雷諾?;铣?

枯草芽胞桿 Maleimide-PEG2-succinimidyl ester二單加氧3

 


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