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貨號 | FS-X10515 |
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產(chǎn)品介紹:
英文名稱:PP2 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg PP2是一種有效的ATP競爭性的選擇性Src家族抑制劑,抑制Lck和Fyn,IC50分別為4和5nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:172889-27-9 別名:AGL 1879 純度:99.23% 分子式:C??H??ClN? 分子量:301.77 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
中文名稱:Src家族抑制劑(PP2)
英文名稱:PP2
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號:FS-X10515
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
中國考克娃酵母四分子交聯(lián)體4抗體(四旋蛋白)Anti-HYI Antibody突觸囊泡蛋白樣蛋白2(SYTL2)
黃曲霉轉錄因子Tbx18抗體Anti-IBSP Antibody突觸囊泡蛋白Ⅻ(SYT12)
芽胞桿菌干燥綜合征相關蛋白2抗體Anti-ICAM1 Antibody突觸囊泡蛋白Ⅺ(SYT11)
天白鏈霉菌甲狀腺激受體相互作用蛋白4抗體Anti-ICAM1 Antibody突觸囊泡蛋白ⅩⅦ(SYT17)
多根硬皮馬勃β-taxilin蛋白抗體Anti-ICAM1 Antibody(PB0053)突觸囊泡蛋白ⅩⅥ(SYT16)
樟疫霉轉錄因子E2F二聚體蛋白2抗體Anti-ICA1 Antibody突觸囊泡蛋白ⅩⅤ(SYT15)
產(chǎn)黃青霉TIP30蛋白抗體Anti-ICAM1 Antibody(PB0054)突觸囊泡蛋白ⅩⅣ(SYT14)
不動桿菌酪蛋白硫轉移1抗體Anti-ICOS Antibody突觸囊泡蛋白ⅩⅢ(SYT13)
黑曲霉Toll樣受體5抗體Anti-ICAM2 Antibody突觸囊泡蛋白Ⅹ(SYT10)
懶惰甲基桿菌跨膜和泛樣結構域蛋白1抗體Anti-ICOS Antibody突觸囊泡蛋白Ⅸ(SYT9)
舒氏氣單胞菌磷化翻譯控制腫瘤蛋白抗體Anti-ICOS Antibody突觸囊泡蛋白Ⅷ(SYT8)
紫紅曲霉磷化調節(jié)染色體組裝激1抗體Anti-ICOS Antibody突觸囊泡蛋白Ⅶ(SYT7)
Bacillus subtilis subsp. inaquosorum 腫瘤抑抗體Anti-ID2 Antibody突觸囊泡蛋白Ⅵ(SYT6)
草木樨中華根瘤菌轉錄因子Tbx3抗體Anti-IDE Antibody突觸囊泡蛋白Ⅴ(SYT5)
德氏乳桿菌保加利亞亞種磷化酪羥化抗體Anti-IDE Antibody突觸囊泡蛋白Ⅳ(SYT4)
黃網(wǎng)鏈霉菌轉錄因子3抗體(螺旋環(huán)螺旋蛋白HE47)Anti-IDE Antibody突觸囊泡蛋白Ⅲ(SYT3)
5-羥色胺受體1E抗體多粘芽孢桿菌小鼠肺大動脈內皮細胞
5-羥色胺受體1F抗體醋桿菌屬小鼠肺動脈成纖維細胞
5-羥色胺受體2A抗體羊肚菌屬(斜面)小鼠氣管和支氣管上皮細胞
5-羥色胺受體2B抗體水井坊梭菌小鼠肺大靜脈內皮細胞
Src家族抑制劑(PP2)粗毛擬革蓋 硝鈀(II) 水合物肌酐
美澳型核果褐腐病 4-硝基-L-苯尿肌酐
尖孢鐮刀 溴化鎳 水合物血肌酐
短小芽孢桿 4-硝基吡唑尿囊
黃色毛霉 4-溴吡唑四氫生物蝶呤
萬壽菊鏈格孢 麥芽三糖水合物墨蝶呤還原
乳乳球乳亞種 3-異喹啉甲 水合物甲狀腺過氧化物
乳乳球 硝銦水合物白介11
豌豆根瘤 8-羥基喹啉-5-磺 水合物血小板生成
鏈霉 二甲基二硫代鈉 水合物β淀粉樣蛋白1-42
紅酵母屬 1,3-二溴-5-(三氟甲氧基)苯胰島樣生長因子1
近綠曲霉 2-羥基-6-甲基吡粒集落激因子
酮叢毛單胞 (1S,2R,5R)-2-(羥甲基)-5-乙烯基奎寧環(huán)透明質
藤黃輪絲鏈霉 (1S,2S,5S)-2-(羥甲基)-5-乙烯基奎寧環(huán)層粘連蛋白
擬金發(fā)蘚黏液桿 雙(二苯基膦)IV型膠原
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