HDAC6抑制劑-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10828

中文名稱：HDAC6抑制劑

英文名稱：Tubastatin A Hydrochloride

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

貨號：FS-X10828

產(chǎn)品介紹:

Tubastatin A Hydrochloride是一種有效的，選擇性的HDAC6抑制劑，IC50值為15nM，對其選擇性是HDAC8外的其他亞型的1000多倍。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1310693-92-5

別名：Tubastatin A HCl;TSA HCl

純度：97.32%

分子量：371.86

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

腐霉*人E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白Anti-OR6J1 Antibody人透明質(zhì)(HAase)

菊粉血桿菌大鼠糖皮質(zhì)激受體αAnti-OR6Q1 Antibody人透明質(zhì)(HAase)

褐離褶傘小鼠血小板衍生生長因子可溶性受體αAnti-OR6K2 Antibody人天門冬基轉(zhuǎn)移(AST)

果生鏈核盤菌小鼠血小板衍生生長因子ABAnti-OR6S1 Antibody人天門冬基轉(zhuǎn)移(AST)

細(xì)鏈格孢大鼠Ⅳ型膠原Anti-OR6T1 Antibody人性磷(ACP)

殺真菌鏈霉菌人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子Anti-OR6P1 Antibody人性磷(ACP)

狹窄革菌大鼠己糖激Anti-OR7A Antibody人葡萄糖6磷異構(gòu)(GPI)

耐鹽枝孢小鼠P選擇Anti-OR7C1 Antibody人葡萄糖6磷異構(gòu)(GPI)

巨枝膝梗孢人白活化黏附因子Anti-OR7E5P Antibody人磷葡萄糖變位(PGM)

蠟葉曲霉小鼠L解Anti-OR7C2 Antibody人磷葡萄糖變位(PGM)

異常威克漢姆酵母大鼠糖原合成激Anti-OR89 Antibody人亮?；?LAP)

根瘤菌人活化AAnti-OR8B2 Antibody人亮酰基肽(LAP)

青變色鏈霉菌人神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1Anti-OR8B4 Antibody人鏈激(SK)

多色節(jié)桿菌大鼠CXC趨化因子配體16Anti-OR8B2 Antibody人鏈激(SK)

季也蒙邁耶氏酵母小鼠可溶性CD30配體Anti-OR89 Antibody人核糖核(RNASE)

釀酒酵母大鼠高敏狀腺原Anti-OR8G1 Antibody人核糖核(RNASE)

復(fù)制因子A蛋白2#黑腐皮殼菌人神經(jīng)上皮瘤細(xì)胞

Ras相關(guān)GTP結(jié)合蛋白抗體殼梭孢屬小鼠Lewis肺癌瘤株

RAS相關(guān)蛋白癌基因Rab14抗體#黑蔥花霉屬615小鼠樹突狀細(xì)胞肉瘤瘤株

環(huán)指蛋白148抗體#齒梗孢霉屬KM小鼠網(wǎng)織細(xì)胞肉瘤瘤株
HDAC6抑制劑根瘤屬 XLD瓊脂培養(yǎng)基瘦

星狀諾卡氏亞硫鉍瓊脂培養(yǎng)基天門冬氨基轉(zhuǎn)移

小孢根霉須狀變種三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基透明質(zhì)

綠淀粉鏈霉麥康凱瓊脂培養(yǎng)基微管相關(guān)蛋白輕鏈3

草青霉伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基（Levine）周期D1

阿伯丁沙門氏 -蛋白胨緩沖液胰島樣生長因子1

釀酒酵母瓊脂培養(yǎng)基S腫瘤壞死因子α

線蟲被毛孢 RV肉湯（EP）轉(zhuǎn)化生長因子β受體1

疏棉狀嗜熱霉甘露鹽瓊脂培養(yǎng)基坦布蘇病

傳染性支氣管炎病酪蛋白胨大豆吐溫20培養(yǎng)基血紅蛋白

土曲霉原變種大豆-干酪消化物瓊脂培養(yǎng)基狀腺原

諾卡氏大豆-干酪消化物培養(yǎng)基甲狀腺

栗酒裂殖酵母 BairdParker瓊脂基礎(chǔ)促腎上腺皮質(zhì)

冠突曲霉溴化十六烷基三瓊脂培養(yǎng)基總甲狀腺

多黏類芽孢桿假單胞瓊脂培養(yǎng)基F組

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