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貨號(hào)	FS-X9760

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：姬姆薩染色液(吉姆薩染液)

英文名稱：Giemsa Staining Solution

產(chǎn)品規(guī)格：250mL

貨號(hào)：FS-X9760

產(chǎn)品介紹:

本產(chǎn)品由溶液A(Giemsa Stain 儲(chǔ)存液,10×)和溶液B(磷酸鹽緩沖液)組成,溶液A：溶液B=1：9混合成工作液后使用；亦可以分開(kāi)使用,即先用Giemsa Stain染色,再經(jīng)磷酸鹽緩沖液處理,亦可以得到滿意的染色效果。

姬姆薩色素(又稱吉姆薩色素)是由天青Ⅱ與伊紅混合而成,Giemsa染色原理和結(jié)果與瑞氏染色基本相同,姬姆薩染色液對(duì)胞漿著色力較強(qiáng),能較好的顯示胞漿的嗜堿性程度,特別是對(duì)血液和骨髓細(xì)胞中的嗜天青、嗜酸性、嗜堿性顆粒,著色清晰,但是對(duì)胞核著色偏深,核結(jié)構(gòu)顯色不佳,故姬姆薩染液常與瑞氏染液聯(lián)合使用。本產(chǎn)品以進(jìn)口的姬姆薩色素、甲醇為主要原料,含本公司*襯染劑,經(jīng)研磨配制而成,能呈現(xiàn)出清晰的細(xì)胞染色效果,經(jīng)常用于組織切片、血液和細(xì)胞涂片、細(xì)菌、染色體顯帶、原生動(dòng)物寄生蟲(chóng)等染色。嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì),與酸性染料伊紅結(jié)合,染粉紅色,稱為嗜酸性物質(zhì)；細(xì)胞核蛋白和淋巴細(xì)胞胞漿為酸性,與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合,染紫藍(lán)色,稱為嗜堿性物質(zhì)；中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍(lán)均可結(jié)合,染淡紫色,稱為中性物質(zhì)。

儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸,室溫避光保存,有效期一年。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

序列相似家族135成員B(FAM135B)英文名：FAM135B 鈣粘蛋白23抗體包裝1g

嗅4(OLFM4)英文名：OLFM4 色p450 2s1抗體包裝5g

胸腺旁腺(PTMS)英文名：PTMS 角蛋白16抗體包裝100g

胸腺嘧啶核磷化(TP)英文名：TP 半胱蛋白蛋白-6抗體包裝25g

胸腺激活調(diào)節(jié)趨化因子(TARC)英文名：TARC c-fos抗體包裝5g

胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成(TSLP)英文名：TSLP 9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框23抗體包裝1g

胸腎表達(dá)趨化因子(BRAK)英文名：BRAK 9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框25抗體包裝100ml

興奮性基轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(EAAT2)英文名：EAAT2 9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框30抗體包裝25ml

信號(hào)7A(SEMA7A)英文名：SEMA7A 9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框37抗體包裝500ml

信號(hào)3E(SEMA3E)英文名：SEMA3E 9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框40抗體包裝1g

鋅指同源框蛋白1B(ZFHX1B)英文名：ZFHX1B 9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框41抗體包裝25g

鋅結(jié)合α2-糖蛋白1(αZGP1)英文名：αZGP1 9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框5抗體包裝5g

心營(yíng)養(yǎng)樣細(xì)胞因子1(CLCF1)英文名：CLCF1 9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框50抗體包裝100g

心型脂肪結(jié)合蛋白(FABP3)英文名：FABP3 9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框57抗體包裝25g

心肌營(yíng)養(yǎng)1(CT1)英文名：CT1 9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框6抗體包裝500g

大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：>97%,培養(yǎng)級(jí)左右不對(duì)稱發(fā)育因子2試劑盒白喉抗體國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品

大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>95%,標(biāo)準(zhǔn)品組織因子途徑抑制物-2試劑盒抗?fàn)钕龠^(guò)氧化物抗體

大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR,可用于培養(yǎng)組織因子途徑抑制物試劑盒乙型肝炎病表面抗體（Anti-HBs）
姬姆薩染色液(吉姆薩染液)枯草芽孢桿 2,4-二溴氟苯胎球蛋白A

綠色木霉 3-溴-2-甲氧基-5-硝基吡啶肽聚糖

榛黃假單胞 2-溴-1,4-二苯碳酐2

大腸桿 ,4-二苯碳酐9

釀酒酵母 2,3-二溴-5-硝基吡啶碳酐Ⅵ

大腸埃希氏 3,5-二氟苯羰基化蛋白

鏈霉屬 2-氨基-3-溴-5-硝基吡啶糖聚糖

長(zhǎng)枝木霉 L-環(huán)己基甘甲酯鹽鹽糖化血紅蛋白A1c

植物乳桿植物亞種 2-氨基-3,4-二氟糖化血清蛋白

美澳型核果褐腐病 1-Boc-哌糖磺基轉(zhuǎn)移10

短小芽孢桿 2,4,6-基芐糖鏈抗原19-9

Vagococcus sp. 1-Boc-哌糖鏈抗原50

楊樹(shù)細(xì)盾霉 5-溴戊基乙酯糖皮質(zhì)受體α

假單胞酞菁鋅糖皮質(zhì)受體β

竹蓀屬 2--4-溴苯甲糖皮質(zhì)誘導(dǎo)的TNF受體配體
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)