當(dāng)前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> c-MET激酶抑制劑(INCB28060)
貨號 | FS-X10704 |
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英文名稱:INCB28060
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號:FS-X10704
產(chǎn)品介紹:
INCB28060是一種有效的選擇性c-MET激酶抑制劑。INCB28060抑制c-MET激酶活性,平均IC50為0.13nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:1029712-80-8 別名:Capmatinib;INC-280 純度:99.78% 分子量:412.42 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
解脂亞羅酵母周期D2抗原Anti-CENPQ Antibody人原鈣黏1(PCDH1)
地衣芽孢桿菌周期D3抗原Anti-CENPU Antibody人原鈣黏1(PCDH1)
竹針孢座囊菌色P450 3A4抗原Anti-CEP135 Antibody人白介2受體(IL-2R)
水稻節(jié)桿菌富半胱肝結(jié)合蛋白61抗原Anti-CEP131 Antibody人白介2受體(IL-2R)
砷、銻、鉍、汞、銀化物檢測試劑 人巨病UL23抗原Anti-CEP135 Antibody人皮膚T虜獲趨化因子(CTACK/CCL27)
大腸埃希氏菌多巴受體-D1抗原Anti-CEP152 Antibody人皮膚T虜獲趨化因子(CTACK/CCL27)
黑木耳多巴受體-D3抗原Anti-CEP170 Antibody人胸腎表達(dá)趨化因子(BRAK/CXCL14)
葡萄座腔菌多巴受體-D4抗原Anti-CEP152 Antibody人胸腎表達(dá)趨化因子(BRAK/CXCL14)
毛束霉多巴受體-D5抗原Anti-CEP170 Antibody人B-淋巴趨化因子1(BLC-1/CXCL13)
油菜菌核病菌多巴β羥化(抗原)Anti-CEP290 Antibody人B-淋巴趨化因子1(BLC-1/CXCL13)
地星結(jié)直腸癌缺失基因抗原Anti-CEP290 Antibody人結(jié)締組織活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)
鹽沼鹽桿菌雙皮質(zhì)抗原Anti-CEP350 Antibody人結(jié)締組織活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)
根桿菌屬損傷DNA結(jié)合蛋白2抗原Anti-CEP57 AntibodyA Fc段受體Ⅰ(FcαRⅠ/CD89)
樟疫霉*防御β1抗原Anti-CEP55 AntibodyA Fc段受體Ⅰ(FcαRⅠ/CD89)
釀酒酵母防御β1抗原(人)Anti-CEP78 AntibodyE Fc段受體Ⅱ(FcεRⅡ/CD23)
pIB139防御β2抗原(小鼠)Anti-CEP95 AntibodyE Fc段受體Ⅱ(FcεRⅡ/CD23)
前列環(huán)受體抗體變異鏈球菌人卵巢腺癌細(xì)胞
磷蛋白聚糖PTPRZ抗體人蒼白桿菌人皮膚鱗狀 細(xì)胞癌細(xì)胞
神經(jīng)特異蛋白酪磷N5抗體Bacillusvireti人皮膚T淋巴細(xì)胞瘤
神經(jīng)細(xì)胞突觸蛋白PCLO抗體BacillusdrentensisSD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞
c-MET激酶抑制劑(INCB28060)綠色木霉 2-吡啶甲γ-氨基丁
球毛殼黃綠色變種 4-吡啶甲白血病抑制因子
黑根須腹 4-溴-N,N-二成纖維生長因子
海濱適鹽 2,5-二苯硫骨堿性磷
大腸埃希 3-溴AMP激活蛋白激α2
核青霉 3'-乙酮AMP激活蛋白激α2
曲霉 (1-溴乙基)苯CD19分子
釀酒酵母 (R)-(-)-2-氨基-1-丁絨毛膜促性腺
紅色紅曲霉 (S)-(+)-2-氨基-1-丁牛血清白蛋白
紅蠟盤 甲基烯叔丁酯酮體
肺鮐希瓦氏 叔丁基二苯基硅烷雄結(jié)合蛋白
包圍漆斑 4-氨基-4H-1,2,4-三唑碳酐
長枝木霉 3-戊過氧化物
冰川薄層屬 惕各乙酯維生D3
黏液桿屬 2,4-二甲基溴苯核因子κB抑制蛋白α
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