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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> PI3Kα和PI3Kδ抑制劑(AZD-8835)
貨號(hào) | FS-X10955 |
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產(chǎn)品介紹:
AZD8835是一種有效的選擇性PI3Kα和PI3Kδ抑制劑,IC50分別為6.2和5.7nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):1620576-64-8 純度:98.61% 分子量:469.54 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
英文名稱:AZD-8835
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號(hào):FS-X10955
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
少根根霉人表面膜免疫球蛋白MBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠T活化連接蛋白(LAT)
大腸埃希菌人表面膜免疫球蛋白DBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗內(nèi)膜抗體(EMAb)
地衣芽孢桿菌人殺傷免疫球蛋白樣受體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗內(nèi)膜抗體(EMAb)
假單胞菌屬人殺傷凝集樣受體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠低密度脂蛋白免疫復(fù)合物(LDL-IC)
昆明漢納酵母人活化蛋白CBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠低密度脂蛋白免疫復(fù)合物(LDL-IC)
小青霉人蛋白CBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠解脲脲原體抗體(UU-Ab)
香菇屬人血小板因子3Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠解脲脲原體抗體(UU-Ab)
芽孢桿菌屬人凝血原片段F1+2Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠神經(jīng)膠質(zhì)纖維性蛋白(GFAP)
大腸埃希菌人甘露糖結(jié)合蛋白/甘露糖結(jié)合凝集Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠神經(jīng)膠質(zhì)纖維性蛋白(GFAP)
蠟狀芽孢桿菌人膜攻擊復(fù)合物Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗中性粒核周抗體(pANCA)
蘋果人優(yōu)球蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗中性粒核周抗體(pANCA)
Mobilicoccus人游離血紅蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠磷脂酰肌抗體IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)
木霉人1Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠磷脂酰肌抗體IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)
淡黃木霉 人一氧化碳血紅蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠15脂加氧(15-LO/LOX)
嗜幾丁質(zhì)類芽孢桿菌人血小板相關(guān)免疫球蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠15脂加氧(15-LO/LOX)
潮間交替紅色桿菌人血小板相關(guān)補(bǔ)體3Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠β干擾(IFN-β/IFNB)
鋅指蛋白598抗體硬柄小皮傘家貓肺細(xì)胞
鋅指脂蛋白-1b抗體白環(huán)粘奧德蘑大額牛腎細(xì)胞
調(diào)節(jié)蛋白1抗體毛木耳恒河猴皮膚細(xì)胞
鋅指/環(huán)指蛋白1抗體潔麗香菇綿羊皮膚細(xì)胞
PI3Kα和PI3Kδ抑制劑(AZD-8835)釀酒酵母 化亞錫一氧化氮
芽孢桿 化鎳誘導(dǎo)型NO合
蘋果黑腐皮殼 化鎂幾丁質(zhì)
尕海湯飛凡 化組織蛋白H
鐵鉆土鏈霉 線粒體促凋亡蛋白
披發(fā)糖多孢披發(fā)亞種 化亞銅半胱蛋白3
釀酒酵母 無(wú)水化鋰核內(nèi)切G
向日葵鏈格孢 化鋰抗凋亡因子
涅氏短狀桿 化鈷轉(zhuǎn)化因子2
猴頭菇 無(wú)水化鈣彈性蛋白
香菇(可訂購(gòu)) 化鈣鎖鏈
費(fèi)氏中華根瘤 二叉頭框蛋白01
鹽古桿 正辛補(bǔ)體片段2a
香菇 3,5-二甲補(bǔ)體片段3b
相思根瘤 磺基水楊鈉補(bǔ)體片斷3a
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