DNA合成抑制劑(Gemcitabine)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10302

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：DNA合成抑制劑(Gemcitabine)

英文名稱：Gemcitabine

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|100mg|200mg|500mg|1g

貨號(hào)：FS-X10302

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：Gemcitabine

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|100mg|200mg|500mg|1g

Gemcitabine是一種DNA synthesis抑制劑，作用于BxPC-3，Mia Paca-2，PANC-1，PL-45和AsPC-1細(xì)胞，IC50分別為37.6，42.9，92.7，89.3和131.4nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：95058-81-4

別名：NSC 613327;LY188011

純度：98.0%

分子量：263.2

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

豬丹絲菌Ki67蛋白抗體Human PLCD3 銜接蛋白活化因子1(APAF1)

釀酒酵母離子通道蛋白EAG1抗體Human PLCD4 ?；囸I(AG)

蘇云金芽胞桿菌轉(zhuǎn)染抑癌基因KLF6抗體Human Plexin B2 酰化激蛋白(ASP)

盤長(zhǎng)孢狀盤孢KLF樣轉(zhuǎn)錄因子8抗體Human PLCH1 纖維母生長(zhǎng)因子受體1癌基因伴侶(FGFR1OP)

枯草芽孢桿菌胞質(zhì)接頭蛋白Keap1抗體Human PLCL2 纖維母表面抗原(FSP)

異常漢遜酵母磷化腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子5抗體Human PLCD4 纖維連接相關(guān)抗原(FRA)

枯草芽孢桿菌磷化抑癌蛋白EZH2抗體Human Plexin B2 纖維連接蛋白(FN)

大腸埃希菌AEG-1抗體Human PLCH1 纖維介蛋白(fgl2)

桔青霉白介6抗體Human PLCL2 纖維膠凝蛋白3(FCN3)

小單孢菌低密度脂蛋白抗體Human PLCH1 纖維蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)

LRRC19蛋白抗體Human PLCL2 纖維蛋白原α鏈(FGA)

麥根腐平臍蠕孢層粘連蛋白受體1單克抗體Human PLA2G4F 纖維蛋白原(Fb)

粉紅鐮刀菌層粘連蛋白受體1單克抗體Human PLA2G4E 纖維蛋白溶(PL/Fbn)

盔形畢赤酵母T活化連接蛋白抗體Human PON3(Serum paraoxonase/lactonase 3) 纖維蛋白(Fibrin)

弗雷德里克斯堡假單胞菌LIX1抗體Human PLAC1L 纖調(diào)蛋白(FMOD)

單格孢屬凝集樣氧化型低密度脂蛋白受體抗體Human PLAGL2 纖溶抑制因子/凝血激活的纖溶抑制物(TAFI)

蘇云金芽孢桿菌Bacillus│thuringiensis 質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(T)白樺脂

球孢白僵菌Beauveria│bassiana 質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(HPLC)(T)棗仁皂D

玉蜀黍赤霉（麥類赤霉病菌）Gibberella│zeae 質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)棗仁皂B
DNA合成抑制劑(Gemcitabine)葡萄座腔 6-甲氧基苯并噻唑草

釀酒酵母 1-(3-基)-哌（易）隱孢子蟲(chóng)

Sphingomonas desiccabilis 2,4-二苯基咪唑胃泌釋放肽前體

粘著劍 2-溴-6-甲氧基苯并噻唑脲

枯草芽胞桿 2-吡甲神經(jīng)鞘磷脂

謝瓦散囊 2-氨基-5-甲氧基法尼基轉(zhuǎn)移

藤倉(cāng)赤霉 3-羥基-4-甲氧基甲酯磷脂A2

枯草芽孢桿 3-氨基-6--4-高分子脂聯(lián)

*灰葡萄孢 2--5-基-3-法尼基轉(zhuǎn)移β

假諾卡氏葡萄糖鈣一水合物法尼基轉(zhuǎn)移α

加納鏈霉 4,4-二甲基-2-吡咯烷酮肽基精脫亞氨

尖孢鐮刀二苯并噻吩-2-非磷化酮脫氫

新城疫病 2-吡啶-5-磺酰新蝶呤

殼蕉孢 2-吡啶-3-磺酰?；Y(jié)合蛋白
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)