葡萄糖代謝抑制劑-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10300

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：葡萄糖代謝抑制劑

英文名稱：2-Deoxy-D-glucose

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|1g|5g

貨號：FS-X10300

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：2-Deoxy-D-glucose

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|1g|5g

2-Deoxy-D-glucose是一種葡萄糖類似物，為葡萄糖代謝抑制劑，通過作用于己糖激酶(hexokinase)來抑制糖酵解。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：154-17-6

別名：2-Deoxy-D-arabino-hexose;D-Arabino-2-deoxyhexose

純度：98.84%

分子量：164.16

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

鴨疫里氏桿菌Kelch樣蛋白24抗體Human POLD3 新生甲狀腺(NN-T4)

異常漢遜酵母異常變種Kelch樣蛋白21抗體Human PNKD(Paroxysmal nonkinesiogenic dyskinesia protein) 新生兒促甲狀腺(N-TSH)

擲孢酵母Kelch樣蛋白25抗體Human LRP6(Low-density lipoprotein receptor-related protein 6) 新喋呤(NEOP)

卷柄根霉驅動蛋白KNS1抗體Human PNLDC1 鋅轉運蛋白6(ZnT6)

枯草芽孢桿菌驅動蛋白家族成員1B抗體Human PNMA1 鋅轉運蛋白4(ZnT4)

腫痂鏈霉菌劍蛋白p80抗體Human PNKP 鋅指蛋白RIZ(PRDM2)

奧氏蜜環(huán)菌樣蛋白1抗體Human PNMA2 鋅指蛋白644(ZNF644)

克雷伯氏菌組蛋白H3K9甲基轉移4抗體Human PMF1 鋅α2糖蛋白(AZGP1)

黑曲霉離子通道蛋白家族成員3抗體Human PMFBP1 心型脂肪結合蛋白(h-FABP)

空腸彎曲桿菌角蛋白82抗體Human KRT6A(KeRatin, type II cytoskeletal 6A) 心鈉肽(ANP)

草鏈霉菌20號染色體開放閱讀框19抗體Human PNMA2 心納(ANF)

粉褐粉孢牛肝菌*角膜蛋白多糖抗體Human PMFBP1 心肌營養(yǎng)1(CT-1)

空泡單胞菌含賴卷曲螺旋蛋白1抗體Human KRT6A(KeRatin, type II cytoskeletal 6A) 心肌膜B1-AR(B1-AR)

釀酒酵母激肽釋放3/舒血管3抗體Human PMF1 心肌特異性肌鈣蛋白T(c)

中慢生華癸根瘤菌上皮鋅指蛋白1, 2, 4抗體Human PLS1 心肌錨蛋白重復域1(ANKRD1)

植物乳桿菌腸道內富含的Kruppel樣因子/上皮鋅指蛋白4抗體Human PLP2(Proteolipid protein 2) 心肌肌凝蛋白輕鏈1(CMLC-1)

沙福芽孢桿菌Bacillus│safensis 質量規(guī)格：>99.0%(GC)(T)5-O-基維斯阿

美味牛肝菌Boletus│edulis Bull.:Fr. 質量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(T)松果菊

白色假絲酵母Candidaalbicans(Robin)Berkhout 質量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(T)異類葉升麻
葡萄糖代謝抑制劑Pseudomonas oryzihabitans 2-氨基-1-(2,5-二甲氧基苯基)乙酮鹽鹽α2 腎上腺能受體

菜豆間座殼 4-苯基咪唑幽門螺桿尿

克魯斯假絲酵母 (RS)-2-氨基-1,1,1-三氟烷鹽鹽SRC;FGR;YES相關FYN癌基因

灰色鏈霉銹色變種 1-溴-2,4,5-三苯脂酰CoA合成

地衣芽孢桿 1,4-二-2-苯DPPH自由基清除能力

威特弗拉里亞鞘氨盒 5-溴吡啶-2-羧甲酯早期應答基因3

馬德里毛殼 4'-芐氧基-2'-羥基苯乙酮果膠

花生根瘤 5-甲基煙甲酯纖維

肉質鏈霉噻-2-甲肟抗硬皮病70

戈登氏（加詞待譯） 2-氟-5-甲甲酯非受體型蛋白酪磷2

食石油類諾卡氏 (R)-2-羥基-4-苯基丁ATP結合盒轉運體G2

桃中田殼小圓孢 2--5-氟苯乙酮干燥綜合征抗原A1

釀酒酵母甲脒鹽鹽肉堿軟脂?；D移1

布氏假單胞 1,4-苯并二惡烷-6-甲抗sp100抗體

毛柄(金針菇) 2-氟-4-苯白介14
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)