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行業(yè)產(chǎn)品
當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> MMP/TACE和ADAM抑制劑(TAPI-2)
貨號(hào) | FS-X11023 |
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英文名稱:TAPI-2
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg
貨號(hào):FS-X11023
產(chǎn)品介紹:
TAPI-2是基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP),腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)換酶(TACE)和解聯(lián)蛋白和金屬蛋白酶(ADAM)的廣譜抑制劑,對(duì)MMP的IC50值為20±10μM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):187034-31-7 純度:95.93% 分子量:415.53 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
釀酒酵母Pseudomonas putida大鼠激M2型同工(M2-PK)
黃桿菌Pseudomonas putida大鼠乙酰受體抗體(AChRab)
生活飲用水 pH 值 Pseudomonas putida大鼠乙酰受體抗體(AChRab)
黏液桿菌Pseudomonas putida大鼠γ基丁(GABA)
擬莖點(diǎn)霉Pseudomonas putida大鼠γ基丁(GABA)
*蛹蟲草Pseudomonas putida大鼠5羥色(5-HT)
新月彎孢Pseudomonas putida大鼠5羥色(5-HT)
大腸埃希菌Pseudomonas putida大鼠P物質(zhì)受體(SP-R)
節(jié)桿菌Pseudomonas putida大鼠P物質(zhì)受體(SP-R)
黃傘Pseudomonas putida大鼠P物質(zhì)(SP)
弗氏檸檬桿菌Pseudomonas putida大鼠P物質(zhì)(SP)
黑曲霉Pseudomonas putida大鼠αL巖藻糖(AFU)
枯草芽胞桿菌Pseudomonas putida大鼠αL巖藻糖(AFU)
雜色曲霉Pseudomonas putida大鼠甲狀腺過氧化物(TPO)
棘托竹蓀Pseudomonas putida大鼠甲狀腺過氧化物(TPO)
植物乳桿菌Pseudomonas putida大鼠胰島原(PI)
互養(yǎng)蛋白2抗體黃綠蜜環(huán)菌總蛋白(TP)比色法測試盒(考馬斯亮藍(lán)法)
互養(yǎng)蛋白3抗體花臉香蘑白蛋白(ALB)比色法測試盒(溴甲綠法)
互養(yǎng)蛋白1,2,3抗體大球蓋菌蛋白質(zhì)羰基含量比色法測試盒(測血清、組織)
蓬亂蛋白2抗體牛肝菌脯(Pro)比色法測試盒
MMP/TACE和ADAM抑制劑(TAPI-2)阿舒假囊酵母 異新補(bǔ)骨脂異黃酮
白靈側(cè)耳 異補(bǔ)骨脂色烯查耳酮
鏈球?qū)?/span> 補(bǔ)骨脂色烯查耳酮
大球蓋菇 黃芩黃酮II
蘇云金芽胞桿蘇云金亞種 去甲漢黃芩
茄勞爾氏 5,2',6'-三羥基-6,7,8-氧基黃酮
裂褶 粘毛黃芩II
三葉草根瘤 南五味子甲酯
潘諾尼亞鎖霉 3-O-順式對(duì)香豆酰委陵菜
湖弗萊德門氏 3-beta-O-反式-對(duì)-香豆酰馬期里
葉點(diǎn)霉 3-beta-O-順式對(duì)香豆??屏_索
芽殖球?qū)?/span> 3-beta-O-順式-對(duì)-香豆酰馬期里
大腸埃希氏 7-羥基-beta-咔啉-1-
飲料 安賽蜜、阿斯巴甜 苦木西堿Q
白色念珠 11-O-羅漢果III
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