GE Ficoll-Paque PLUS淋巴細(xì)胞分離液-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9756

產(chǎn)品介紹:

Ficoll-Paque PLUS是經(jīng)驗(yàn)證可在實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用的人淋巴細(xì)胞分離液，分離人淋巴細(xì)胞用于體外研究。Ficoll-Paque PLUS是一種即開(kāi)可用的無(wú)菌分離液，優(yōu)化的分離液密度可從周圍血液中獲得高產(chǎn)率的淋巴細(xì)胞，并可以維持B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的生長(zhǎng)和分布。低水平內(nèi)毒素含量(<0.12 EU/ml)。Ficoll-Paque PLUS培養(yǎng)基包含聚蔗糖(Ficoll PM400, 5.7g)，二乙酰氨基三碘苯甲酸(9.0g)和乙底酸鈣二鈉。產(chǎn)品可應(yīng)用于組織相容性試驗(yàn)，細(xì)胞介導(dǎo)免疫檢測(cè)等。#17-1440-02 Ficoll-Paque PLUS為6瓶裝，每瓶100ml。

檢測(cè)原理：去纖維蛋白或抗凝血?jiǎng)┨幚淼难涸贔icoll-Paque PLUS分離液中分層，離心分離后，管底部含有聚集的紅細(xì)胞，紅細(xì)胞層上面一層含有大量粒性白細(xì)胞，而淋巴細(xì)胞停留在血漿和Ficoll-Paque PLUS界面處(同時(shí)含有沉淀微粒血小板和單核細(xì)胞)?；厥战缑嫣幜馨图?xì)胞，用平衡鹽溶清洗去除血小板、Ficoll-Paque PLUS分離液和血漿。

保存溫度：4-30℃

應(yīng)用：

細(xì)胞分離

產(chǎn)品特性：

物理狀態(tài)：無(wú)色液體

大密度：1.078 g/ml

pH范圍：5.5-7.5

內(nèi)毒素活性：< 0.12 EU/ml

從人周圍血液中分離淋巴細(xì)胞

保質(zhì)期：3年

中文名稱：GE Ficoll-Paque PLUS淋巴細(xì)胞分離液

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：100ml

貨號(hào)：FS-X9756

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白6(IGFBP6)英文名：IGFBP6 磷化EGF應(yīng)答因子1抗體包裝25g

胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4(IGFBP4)英文名：IGFBP4 β抗體包裝5g

胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP3)英文名：IGFBP3 磷化BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白抗體包裝25g

胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白2(IGFBP2)英文名：IGFBP2 ARF鳥交換因子BIG1抗體包裝5g

胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白1(IGFBP1)英文名：IGFBP1 腦特異性同源蛋白BSX抗體包裝1g

胰島樣生長(zhǎng)因子2(IGF2)英文名：IGF2 鋅指蛋白47抗體包裝25g

胰島樣生長(zhǎng)因子1(IGF1)英文名：IGF1 ?BTBD14A蛋白抗體包裝5g

胰島樣蛋白6(INSL6)英文名：INSL6 鋅指蛋白851抗體包裝25g

胰島樣蛋白5(INSL5)英文名：INSL5 嗜乳脂蛋白2亞型A1抗體包裝5g

胰島樣蛋白3(INSL3)英文名：INSL3 磷化c-fos抗體包裝100g

胰島受體底物2(IRS2)英文名：IRS2 磷化c-fos抗體包裝25g

胰島受體底物1(IRS1)英文名：IRS1 磷化原癌基因c-Jun抗體包裝500g

胰島受體(ISR)英文名：ISR 磷化原癌基因c-kit抗體包裝5ml

一氧化氮合運(yùn)輸因子(NOSTRIN)英文名：NOSTRIN 1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框148抗體包裝1g

葉受體1(FOLR1)英文名：FOLR1 性T抗原-4抗體包裝5g

去整合樣金屬蛋白23抗體白介21(IL21)MK-801 (Dizocilpine) is a potent N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptor antagonist
GE Ficoll-Paque PLUS淋巴細(xì)胞分離液球孢毛霉 2-吡啶甲酰視黃

類芽胞桿 2,5-二溴-3-吡啶視錐蛋白樣蛋白1

腐霉噻唑-5-甲嗜鉻粒蛋白A

芽孢桿屬咪唑-2-甲嗜環(huán)蛋白;親環(huán)A

側(cè)耳 2-巰基嘧啶嗜環(huán)蛋白;親環(huán)B

果生鏈核盤 (3,5-二甲基吡唑-1-基)乙嗜粒趨化蛋白Eotaxin 1

貝倫格葡萄座腔坎地沙嗜活化趨化因子3

大腸埃希氏 1-甲基-1H-吡唑-5-羧嗜性粒趨化蛋白

微黃漢納酵母 2--9,9-二甲基芴嗜性粒趨化蛋白

豬丹絲 4-溴-3-甲乙酯嗜性粒陽(yáng)離子蛋白

硬結(jié)節(jié)桿 2-溴-5-甲苯嗜異性抗體

大腸桿屬 2,5,6-三氨基-4-磺基嘧啶受體TNFRSF結(jié)合絲蘇激2

pcDNA6/V5-His A 2,8-二喹啉-3-甲瘦

叢花青霉 N-甲基-1-萘瘦受體

棉花新鞘氨 2-(2-甲氧基乙氧基)乙舒

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