DNA甲基化抑制劑-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X10296

中文名稱：DNA甲基化抑制劑

英文名稱：5-Azacytidine

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|100mg|200mg|500mg

貨號：FS-X10296

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：5-Azacytidine

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|100mg|200mg|500mg

5-Azacytidine是一種胞苷類似物，通過限制DNA甲基轉(zhuǎn)移酶來抑制DNA甲基化。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：320-67-2

別名：Ladakamycin;5-AzaC;Azacitidine

純度：98.24%

分子量：244.2

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

橢圓釀酒酵母抗體Human PPIL6 血管內(nèi)皮粘附分子1(VCAM-1)

空泡鹽紅菌激肽釋放7抗體Human PPAT 血管內(nèi)皮生長因子受體3(VEGFR-3/Flt-4)

黑曲霉激肽釋放9抗體（舒血管9）Human PPM1A 血管內(nèi)皮生長因子受體2(VEGFR-2/Flk-1)

大腸埃希菌激肽釋放14抗體Human PPCS 血管內(nèi)皮生長因子受體1(VEGFR-1/Flt1)

側(cè)孢短芽胞桿菌電壓閥門通道混合器相關(guān)亞家族成員7抗體Human PPEF1 血管內(nèi)皮生長因子受體1(VEGFR1)

淡紫擬青霉ATP敏感性通道亞基kir6.2抗體Human PPM1B 血管內(nèi)皮生長因子E(VEGF-E)

小平菇（秀珍菇）TIP60抗體Human PPM1F 血管內(nèi)皮生長因子D(VEGF-D)

根瘤菌組蛋白賴特異性脫甲基1抗體Human PPP1CB 血管內(nèi)皮生長因子C(VEGF-C)

豌豆根瘤菌轉(zhuǎn)錄因子GATA3結(jié)合蛋白G3B抗體Human PPM1G 血管內(nèi)皮生長因子B(VEGF-B)

大腸桿菌磷化周期蛋白依賴激抑制因子1C抗體Human PPID 血管內(nèi)皮生長因子A(VEGF-A)

吸水鏈霉菌磷化通道蛋白DRK1抗體Human POU3F3 血管內(nèi)皮生長因子(VEGF165)

熱帶假絲酵母離子通道蛋白Kv3.4抗體Human POLR3A 血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)

頂孢頭孢霉離子通道蛋白Kv3.3抗體Human POLR3D 血管內(nèi)皮生長因子受體3(VEGFR3/Flt4)

鐘器腐霉組蛋白去甲基化JMJD2B抗體Human POLR3B 血管內(nèi)皮生長因子受體1(VEGFR-1/Flt1)

嗜熱脂環(huán)芽胞桿菌肝果糖激抗體Human POU3F4 血管內(nèi)皮生長因子121(VEGF121)

鬼傘脊柱側(cè)后凸畸形肽抗體Human POU4F2 血管內(nèi)皮鈣粘著蛋白復(fù)合體(VE-cad)

植物乳桿菌Lactobacillus│plantarum 質(zhì)量規(guī)格：>99.0%(GC)續(xù)隨二萜

ATCC700850=DSM11927資源名稱: 方形鹽盒菌質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(T)

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：>99.0%(GC)(T)石榴皮鞣
DNA甲基化抑制劑密叢毛霉 α,α-二乙酯脂肪甘油三酯脂

膠孢 1-芐基海因胱天蛋白1

籬邊粘褶七氟異基活化受體樣激1

叢毛紅曲 4-乙氧基苯乙肝

墻支頂孢 2,5-二煙甲酯脫2

酵母吲唑-4-羧脂肪酰水解1

食屬 7-羧基-1H-吲唑單酰基甘油酯

假委內(nèi)瑞拉鏈霉基氧膦N-乙酰天門冬

釀酒酵母 1-芐基-4-甲角蛋白18

薄層桿 3-基-4-氟甲酯氫ATP

弗吉尼亞鏈霉 2,3,5-三氟苯甲煙酰

Microbacterium halotolerans 6--咪唑并[1,2-b]吡-3-甲乙酯趨化

芽孢桿屬 1-甲基-5-硝基-1H-甲殼質(zhì)蛋白40

白僵 4-丁縮二甲半胱蛋白11

奇異球環(huán)丁半胱蛋白1β

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