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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> NF-κB抑制劑(Parthenolide)
貨號(hào) | FS-X10706 |
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產(chǎn)品介紹:
Parthenolide是一種NF-κB抑制劑,可降低組蛋白脫乙酰酶1(HDAC-1)和DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):20554-84-1 別名:(-)-Parthenolide 純度:99.13% 分子量:248.32 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
英文名稱:Parthenolide
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|50mg|100mg|200mg
貨號(hào):FS-X10706
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
白布勒酵母轉(zhuǎn)錄因子E2F-4抗原Anti-CHD4 Antibody人干擾調(diào)節(jié)因子(IRF)
多粘類芽孢桿菌轉(zhuǎn)錄因子E2F-6抗原Anti-CHP2 Antibody人干擾調(diào)節(jié)因子(IRF)
新疆鹽地桿菌屬E2 tag多肽抗原Anti-CHPF Antibody人淋巴β(LTB)
葡萄球菌膠質(zhì)谷運(yùn)載蛋白3抗原Anti-CHPF2 Antibody人淋巴β(LTB)
假單胞菌屬EB病編碼核蛋白-3Anti-CHPF2 Antibody人淋巴α(LTA)
弗雷克氏志賀氏菌內(nèi)皮轉(zhuǎn)化1抗原Anti-CHPF Antibody人淋巴α(LTA)
球毛殼內(nèi)皮轉(zhuǎn)化2抗原Anti-CHRD Antibody人CC趨化因子受體1(CCR1)
圍小叢殼菌嗜性粒陽離子蛋白抗原Anti-CHRNA10 Antibody人CC趨化因子受體1(CCR1)
蘇云金芽胞桿菌外胚層發(fā)育不良抗原Anti-CHRAC1 Antibody人CX3C趨化因子受體1(CX3CR1)
海洋交替赤桿菌類表皮生長因子域7抗原Anti-CHRNA9 Antibody人CX3C趨化因子受體1(CX3CR1)
假單胞菌早期反應(yīng)基因-1/應(yīng)急反應(yīng)生長基因1抗原Anti-CHRM5 Antibody人肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子(PARC/CCL18)
蘋果殼囊孢磷化eIF-4E(Ser209)抗原Anti-CHRNA3 Antibody人肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子(PARC/CCL18)
枯草芽孢桿菌轉(zhuǎn)錄因子ELK1抗原Anti-CHRNE Antibody人黏膜地址黏附分子(MAdCAM-1)
釀酒酵母彈性蛋白抗原Anti-CHST10 Antibody人黏膜地址黏附分子(MAdCAM-1)
薛瓦酵母ELAVL1/HuR多肽抗原Anti-CHST10 Antibody人β干擾(IFN-β/IFNB)
釀酒酵母表皮膜蛋白1抗原Anti-CHST13 Antibody人β干擾(IFN-β/IFNB)
妊娠相關(guān)血漿蛋白A2抗體產(chǎn)氣莢膜梭菌人急性淋巴細(xì)胞白血病T淋巴細(xì)胞
血漿谷羧肽抗體弗氏檸檬桿菌犬癌細(xì)胞
PAP-α/β/γ/多聚合α/β/γ抗體嗜熱脂肪芽孢桿菌人腦血管平滑肌細(xì)胞
纖溶相關(guān)蛋白B2抗體乙鈣不動(dòng)桿菌人纖維肉瘤
NF-κB抑制劑(Parthenolide)宛氏擬青霉 2-乙酰I型膠原
植物乳桿 2-甲基乙酰苯酮Periostin
桔青霉 2-甲甲酯苯磺酰P物質(zhì)
玫瑰產(chǎn)色鏈霉 2-溴均三α干擾
多粘類芽孢桿 五甘單芐基α酮戊二脫氫
礦泉水中砷質(zhì)控樣品 2-溴間二甲苯β2微球蛋白
肺炎克雷伯氏 甲基糠基二硫β干擾
鴨艾美耳球蟲 1-溴-2-萘γ干擾
黑曲霉 4-丁氧基苯甲癌胚抗原
灰樹花 2-氨基-4--6-甲氧基嘧啶白三烯C4
糙孢籃狀 9-溴菲白介1
哈茨木霉 2,3,4-氧基白介10
松口蘑 N-Boc-乙二白介17
小白側(cè)耳 乙酰溴-α-D-葡萄糖白介18
地衣芽孢桿 4-甲氧基苯基白介1β
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