MEK抑制劑(PD0325901)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10294

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：MEK抑制劑(PD0325901)

英文名稱：PD0325901

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X10294

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：PD0325901

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg

PD0325901是一種具有選擇性的的，ATP非競(jìng)爭(zhēng)性的MEK抑制劑，IC50值為0.33nM，是CI-1040對(duì)ERK1和ERK2磷酸化作用的500多倍。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：391210-10-9

別名：PD325901

純度：99.95%

分子量：482.19

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

松鼠葡萄球菌磷化抑癌蛋白EZH2抗體Human PPP1R9A 血漿抗凝蛋白S(PS)

Pseudomonas batumici 組蛋白去甲基化JARID1B抗體Human PPP1CC 血漿抗凝蛋白C(PC)

少孢哈薩克斯坦酵母硫角質(zhì)抗體Human PPP3R2 血漿激肽釋放(KLKB1)

玫煙色棒束孢角質(zhì)生長(zhǎng)因子調(diào)節(jié)蛋白2抗體Human PPP2CA 血漿膽固酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)

Bacillus sp.離子通道蛋白G蛋白4抗體Human PPP2R1B 血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)

海假交替單胞菌通道多聚體結(jié)構(gòu)域KCTD18抗體Human PPP2CB 血紅氧合2(HO-2)

多主葡萄殼菌胞質(zhì)接頭蛋白Keap1Human PPP1CC 血紅氧合1(HO-1)

芽胞桿菌舞蹈癥相關(guān)蛋白KALRN抗體Human PPP1R10 血紅加氧2(HO-2)

多粘類芽孢桿菌內(nèi)流通道蛋白Kir4.1抗體Human PPP2R2A 血紅加氧1(HO-1)

金黃亞種樣蛋白3抗體Human PPP2R2B 血紅加氧(HO)

釀酒酵母KLF樣轉(zhuǎn)錄因子7抗體Human PPP1R7 血紅蛋白晚期糖基化終末產(chǎn)物(Hb-AGE)

枯草芽孢桿菌Kelch樣蛋白8抗體Human PPP3CB 血紅蛋白β亞基(HB-β)

雞新城疫病血凝抑制試驗(yàn)（HI）陽(yáng)性血清離子通道蛋白家族KCNQ2抗體Human PPP1R8 血紅蛋白α亞基(HB-α)

黑曲霉離子通道多聚體結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體Human PPP3CC 血紅蛋白H(HbH)

黃桿菌通道蛋白1抗體Human PPP1R9A 血紅蛋白C(HbC)

大斑凸臍蠕孢電壓門控通道蛋白1抗體Human PPP3R2 血紅蛋白(Hb)

新城疫病毒Rubulavirus│Newcastle disease virus 質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(T)去氫木香內(nèi)酯

蘇云金芽孢桿菌Bacillus│thuringiensis 質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(T)百秋李

巴斯德畢赤酵母Pichia│pastoris 質(zhì)量規(guī)格：>96.0%(GC)β-胡蘿卜
MEK抑制劑(PD0325901)棕黑腐質(zhì)霉 3,5-二甲基-4-甲氧基苯絲

綠蓋粉孢牛肝（都不提供） 4,4'-(六氟異烯)二鄰苯二甲腺相關(guān)病

殼梭孢屬 1-Boc-3-羥甲基哌腺相關(guān)病IgG抗體

粉紅擲孢酵母 N-Boc-4-表面膜球蛋白M

球毛殼 3--4-嗎啉基-1,2,5-噻二唑神經(jīng)酰

尖孢鐮刀 N-[6--5-(2-甲氧基苯氧基)[2,2'-二嘧啶]-4-基]-4-叔丁基苯磺酰鹽C1q腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白2

鞘氨單胞 1-甲基-1H-咪唑-2-甲乙酯可溶性FMS樣酪激1

蠟狀芽孢桿 L-纈氨酰鹽鹽可溶性Endoglin

臭曲霉 3-氟-2-硝苯金屬蛋白組織抑制因子2

雞傷門氏對(duì)苯丁氧基超氧陰離子

豌豆根瘤 N-Boc-4-乙酯羥基自由基

鴨溫?fù)P球蟲噻奈普汀鈉水合物甘油激

糙皮側(cè)耳 4-甲基-2-氨基-5-氟吡啶酮激

華麗閉核苯基乙漢坦病IgG抗體

黑白铦囊蘑雙硬脂鋁熱休克蛋白96
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)