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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> PAK抑制劑(PF-3758309)
貨號(hào) | FS-X10616 |
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中文名稱:PAK抑制劑(PF-3758309)
英文名稱:PF-3758309
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號(hào):FS-X10616
產(chǎn)品介紹:
PF-3758309是一種有效的PAK抑制劑,能夠抑制PAK4的活性,IC50值為1.3nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):898044-15-0 純度:98.41% 分子量:490.62 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
茶葉 鈧、釔、鑭 PE標(biāo)記的小鼠抗人IgGAnti-SHP-1(PTPN6) Antibody核糖核A6(RNASE6)
黑綠木霉Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗人IgGAnti-SHP-1(PTPN6) Antibody核糖核A4(RNASE4)
煙曲霉生物標(biāo)記的兔抗長(zhǎng)爪沙鼠IgGAnti-SHP1/PTPN6 Antibody核糖核A3(RNASE3)
耐輻射奇球菌突變株PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-FcAnti-SI Antibody核糖核A2(RNASE2)
多粘類芽胞桿菌PE-Cy7標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-FcAnti-SIDT1 Antibody核糖核A13(RNASE13)
群生殼菌PE-Cy3標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-FcAnti-SIRT1 Antibody核糖核A12(RNASE12)
硝基還原假單胞菌PE-CY5標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-FcAnti-SIRT1 Antibody核糖核A11(RNASE11)
弗氏鏈霉菌生物標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈Anti-SIRT2 Antibody(PB0174)核糖核A10(RNASE10)
香菇Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗猴IgMAnti-SIRT4 Antibody核糖核A(RNASE1)
根霉PE標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈Anti-SIRT6 Antibody(PB0375)核糖核Ⅲ(RNASEN)
禽腺病PE-CY5標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈Anti-SIRT3 Antibody核外切1(EXO1)
燦爛類芽胞桿菌Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈Anti-SIX1 Antibody核受體亞家族3C組成員1(NR3C1)
游動(dòng)放線菌Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈Anti-SIX3 Antibody核受體相關(guān)蛋白1(NURR1)
茄腐鐮刀菌PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈Anti-SIRT7 Antibody(PB0376)核仁(NCL)
詹森青霉FITC標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-FcAnti-SIX6 Antibody核仁磷蛋白3(NPM3)
豬鏈球菌分型血清參考品 血清型 SS17辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈Anti-SKAP1 Antibody核仁磷蛋白2(NPM2)
絲或半胱蛋白水解抑制蛋白1抗體固氮菌屬大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物
跨膜硫軟骨蛋白聚糖C抗體克氏梭菌大鼠大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物
神經(jīng)腫瘤Nova1抗原抗體簇孢匍柄霉大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞提取物
突觸細(xì)胞粘附分子3抗體短柄帚霉大鼠腸微血管細(xì)胞提取物
PAK抑制劑(PF-3758309)鏈霉 銻化鎵激錨定蛋白1
弗氏檸檬桿 磷化鎵增殖誘導(dǎo)配體
柱形孢鏈霉 納鐵鋅αL艾杜糖
有柄樹舌靈芝(白芝) 鈦鍶αL艾杜糖
休哈塔假絲酵母 鈦鍶水泡性口炎抗體
土生隱球酵母 氧化鈧(Ⅲ)流感抗體
多形布勒擔(dān)子酵母 鋯鉛(II)伊氏錐蟲抗體
曲霉 鈦鉛焦蟲病抗體
中慢生華癸根瘤 氧化鋰西尼羅河病抗體
屎腸球 氧化鈥連蛋白
木賊鐮孢 氧化鉿(IV)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β
根瘤 氫氧化鎳球蛋白G1
美澳型核果褐腐病 納鐵鈷球蛋白G2
韓國(guó)假單胞 鈦鈣雌二
蛹蟲草(北冬蟲夏草、北蟲草)(可訂購(gòu)) 鈦鋇球蛋白A
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