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貨號(hào)	FS-X9754

操作步驟：

1、貼壁細(xì)胞的消化

①吸除培養(yǎng)液，用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。

②加入少量Trypsin-EDTA solution，略蓋過(guò)細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min，不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。

③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變

化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。

⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落，直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱	英文名稱	產(chǎn)品規(guī)格	產(chǎn)品貨號(hào)
膠原酶IV型	Collagenase IV	100mg	FS-X9754

產(chǎn)品介紹：

本品為IV型膠原酶，≥125 CDU/mg solid（CDU = collagen digestion units），特別適用于胰島組織的消化。

本品來(lái)源于溶組織梭菌（Clostridium histolyticum），是一種酶粗提物，不僅含有膠原酶（更準(zhǔn)確的稱法為梭菌蛋白酶A（clostridiopeptidase A）），能夠降解天然膠原和網(wǎng)狀纖維。還含有其他的一些蛋白酶，多糖酶，脂酶等，分別能夠有效水解結(jié)締組織和上皮組織細(xì)胞外基質(zhì)內(nèi)的其他蛋白、多糖和脂質(zhì)，使得本品非常適用于組織消化。

膠原酶（Collagenase）是一種蛋白酶，一種肽鏈內(nèi)切酶，能夠特異性的識(shí)別Pro-X-Gly-Pro序列（該序列高頻率出現(xiàn)在膠原中，很少發(fā)現(xiàn)于其他蛋白中）并切割該序列中性氨基酸（X）和甘氨（Gly）之間的肽鍵。許多蛋白酶都能水解單鏈且變性的膠原多肽，但膠原酶是一種可以降解具有三股超螺旋結(jié)構(gòu)的天然膠原纖維的蛋白酶，這種膠原纖維廣泛存在結(jié)締組織內(nèi)。

目前商業(yè)化提供的細(xì)菌膠原酶主要根據(jù)膠原酶活性的差異，分為四種類型：膠原酶I型，II型，III型和IV型，在應(yīng)用上有所偏向：

1）膠原酶I（Type I Collagenase）：含有比較均勻的各種酶活力（包括膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白活性）。通常用作上皮細(xì)胞、肝、肺、脂肪和腎上腺組織細(xì)胞的制備；

2）膠原酶II（Type II Collagenase）：含有更高的梭菌蛋白酶活性，通常用于心臟、骨、肌肉、胸腺和軟骨等組織來(lái)源細(xì)胞的制備；

3）膠原酶III（Type III Collagenase）：含有較低的蛋白酶活性，常用于乳腺細(xì)胞的制備；

4）膠原酶IV（Type IV Collagenase）：含有低活性，通常用于胰島細(xì)胞的制備，或者需要維持受體完整性的細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)。

酶活力單位定義

在37℃，pH7.5 的條件下，5h內(nèi)水解膠原產(chǎn)生相當(dāng)于1μM L-亮氨的酶量定義為1個(gè)酶活力單位。

儲(chǔ)存條件：4℃避光，有效期兩年

注意事項(xiàng)：

1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時(shí)試劑損失。

3、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。

6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

7、需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融，否則將會(huì)增加空白吸收，從而影響檢測(cè)結(jié)果。最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。

8、用培養(yǎng)基或 PBS 來(lái)配制待檢測(cè)藥物。如果待測(cè)藥物有還原性，則測(cè)定不含細(xì)胞，僅含有 MTS 的待測(cè)藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入 MTS ，如果吸光度相對(duì)較大，則需要除去培養(yǎng)基，并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測(cè)。

9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。

10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定，對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可，白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。

11、如果不是使用 96 孔板檢測(cè)，MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。

載脂蛋白C4(APOC4)英文名：APOC4 磷化B-Raf抗體包裝500g

載脂蛋白C3(APOC3)英文名：APOC3 磷化癌易感基因1抗體包裝1g

載脂蛋白C1(APOC1)英文名：APOC1 芳香烴受體核轉(zhuǎn)錄蛋白樣1抗體包裝25g

載脂蛋白A4(APOA4)英文名：APOA4 癌易感基因復(fù)合物亞基蛋白3抗體包裝5g

載脂蛋白A2(APOA2)英文名：APOA2 腫瘤轉(zhuǎn)移抑制蛋白BAMBI抗體包裝1g

載脂蛋白A1(APOA1)英文名：APOA1 B淋巴淋巴瘤因子9抗體包裝5g

孕(Pg)英文名：Pg 膽綠還原抗體包裝1g

原肌球調(diào)節(jié)蛋白3(TMOD3)英文名：TMOD3 BIVM蛋白抗體包裝25g

原鈣黏15(PCDH15)英文名：PCDH15 血型Lewis A抗原抗體包裝5g

誘導(dǎo)型一氧化氮合(NOS2)英文名：NOS2 粘蛋白/巖藻糖基轉(zhuǎn)移3抗體包裝1g

硬脂酰去飽和(SCD)英文名：SCD Bloom綜合征相關(guān)蛋白抗體包裝5g

硬骨(SOST)英文名：SOST 骨形態(tài)發(fā)生蛋白8b抗體包裝100g

胺2,3-雙加氧2(IDO2)英文名：IDO2 磷化非受體性蛋白酪激ETK抗體包裝1g

胺2,3-雙加氧(IDO)英文名：IDO 磷化促凋亡調(diào)節(jié)蛋白BNIP3抗體包裝250mg

抑制結(jié)合蛋白(INHBP)英文名：INHBP B淋巴特異性激活OCT結(jié)合蛋白1抗體包裝25g

整合樣金屬蛋白與凝血樣3蛋白抗體白介21(IL21)Alectinib (CH5424802; RO5424802; AF802) 是一種有效，選擇性和口服的 ALK 抑制劑，其 IC50 為 1.9 nM，Kd
膠原酶IV型傘枝犁頭霉 2-氟-4-甲神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3

灰褐鏈霉 N-Boc-4-酮-3-甲甲酯神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子4

枯草芽孢桿 5-基-2-氟苯甲神經(jīng)元特異性烯化

線團(tuán)擬諾卡氏 3--4-氟苯甲蛋白

成晶節(jié)桿二乙氨基乙縮二甲腎上腺

Phoma medicaginis var. medicaginis 4-溴-3-羥基吡啶腎上腺能a1A受體

腐皮鐮孢馬特變種 2-(N-Boc-4-基)乙腎上腺髓質(zhì)

熱球狀尿芽孢桿吡啶-3-磺酰腎上腺髓質(zhì)原

化妝品檢測(cè)用金黃色葡萄球十五碳二元腎

熱吸水鏈霉代二碳鎓六氟磷鹽腎損傷因子1

釀酒酵母間苯二二甲酯腎小球足裂隙膜蛋白

豬丹絲 4-溴-2--6-氟生存

橄欖灰鏈霉 3-氨基-6-吡-2-甲甲酯生長(zhǎng)分化因子11

鏈霉 3,4-二氟苯磺酰生長(zhǎng)分化因子15

副豬嗜血桿 2,6-二氟-4-溴苯生長(zhǎng)分化因子3

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