癌細胞增殖抑制劑-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10707

產(chǎn)品介紹:

Berberine chloride hydrate能有效的抑制多種癌細胞增殖，促進凋亡，能影響MAPK和Wnt/β-catenin通路。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：141433-60-5

別名：Natural Yellow 18

純度：99.56%

分子量：389.83

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

中文名稱：癌細胞增殖抑制劑

英文名稱：Berberine chloride hydrate

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5g

貨號：FS-X10707

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

大豆慢生根瘤菌抗內膜抗原Anti-CHST2 Antibody人可溶性CD38(sCD38)

尖鐮孢內皮抑/內皮他丁抗原Anti-CHST6 Antibody人可溶性CD38(sCD38)

擬青霉E.coli O6大腸桿菌菌體蛋白Anti-CHST9 Antibody人可溶性CD21(CR2/sCD21)

芽孢桿菌屬普通大腸埃希菌菌體蛋白（非致病性）Anti-CHSY1 Antibody人可溶性CD21(CR2/sCD21)

模擬乳粉蠟樣菌質控樣品（定量）EphA1-R受體抗原Anti-CHST8 Antibody人可溶性瘦受體(sLR)

側耳紅生成受體抗原Anti-CIAO3 Antibody人可溶性瘦受體(sLR)

黃綠木霉磷化絲裂原活化蛋白激1/2抗原Anti-CHSY1 Antibody人Toll樣受體9(TLR-9/CD289)

絲裂原活化蛋白激抗原Anti-CIB2 Antibody人Toll樣受體9(TLR-9/CD289)

Au（黑木耳）絲裂原活化蛋白激3抗原Anti-CIDEB Antibody人轉化生長因子β2(TGFβ2)

巧克力色微桿菌絲裂原活化蛋白激4抗原Anti-CIB3 Antibody人轉化生長因子β2(TGFβ2)

Ag13（蘑菇）人磷化雌激受體α多肽抗原Anti-CIT Antibody人單核趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)

釀酒酵母磷化雌激受體α抗原Anti-CKS1B Antibody人單核趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)

巴氏葡萄球菌雌激受體α抗原Anti-CKS2 Antibody人白三烯D4(LTD4)

東方伊薩酵母雌激受體α抗原Anti-CKMT2 Antibody人白三烯D4(LTD4)

Methylobacterium雌激受體β抗原Anti-CKS1B Antibody人N鈣黏蛋白/神經(jīng)鈣黏蛋白(N-Cad)

煙曲霉Ets轉錄因子家族ets1抗原Anti-CKS2 Antibody人N鈣黏蛋白/神經(jīng)鈣黏蛋白(N-Cad)

酪磷PTPδ抗體蛋白酪磷D受體抗體土壤伯克氏菌人食管腺癌細胞

2抗體短乳桿菌人脊索瘤細胞

豬繁殖與呼吸綜合征/豬藍耳病抗體耐放射異常球菌奶牛乳腺上皮細胞

凋亡相關蛋白10抗體青春雙歧桿菌人腎小球系膜細胞
癌細胞增殖抑制劑球孢白僵 2-甲基四-3-硫白介2

細枝孢咪唑-4，5-二羧白介4

大腸桿 1-溴-2,3-二苯白介5

膠凍樣芽胞桿 4-(氨基)白介6

大腸埃希 2-溴-3-甲基丁白介8

厚環(huán)粘蓋牛肝三乙酰氧基氫化鈉半胱蛋白3

燕麥鐮孢 1,1-二烯標準溶液半胱蛋白抑制劑;胱抑C

裂孔平伏 5-氟酮苯羥化

釀酒酵母環(huán)戊表皮生長因子受體

大豆慢生根瘤 2-氨基-4,6-二羥基嘧啶二

蠟狀芽孢桿 2-氨基-4，6-二嘧啶不對稱二甲基精

小孢根霉寡孢變種 2-氨基-4--6-甲基嘧啶超敏C反應蛋白

猴頭菇超氧化物歧化

薄層屬鈦四丁酯雌二

郎伍德鏈霉甲基化聚苯乙烯樹脂 1%DVB交聯(lián)雌

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