SHP2抑制劑-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10292

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：SHP099 hydrochloride

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg

SHP099 hydrochloride是有效選擇性的SHP2抑制劑，IC50值為70nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1801747-11-4

純度：99.40%

分子量：388.72

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

中文名稱：SHP2抑制劑

英文名稱：SHP099 hydrochloride

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10292

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

云芝驅(qū)動蛋白家族蛋白3抗體Human PRCC 血小板相關(guān)補體3(PAC3)

中生根瘤菌驅(qū)動蛋白2抗體Human PRKAR1A(Protein kinase cAMP-dependent type I regulatory subunit alpha) 血小板生長因子(PGF)

枯草芽孢桿菌KIAA1522蛋白抗體Human PRDM10 血小板生成(TPO)

漢遜德巴利酵母離子通道四聚體結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體Human PRKAR1B 血小板膜糖蛋白Ⅳ(GP-Ⅳ)

芽孢桿菌高分子量激肽原重鏈抗體Human PRDM15(PR domain zinc finger protein 15) 血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)

毛栓孔菌通道四聚體結(jié)構(gòu)域蛋白11抗體Human PRDM4 血小板堿性蛋白(PBP/CXCL7)

貝倫格葡萄座腔菌梨生?；?/span>Kelch樣蛋白26抗體Human PRKD2 血小板活化因子(PAF)

滑菇賴，天冬，谷，亮相關(guān)序列抗體Human PREB 血小板反應(yīng)蛋白/凝血敏感蛋白1(TSP-1)

產(chǎn)黃青霉Kelch樣蛋白10抗體Human PRKCDBP 血纖肽/纖維蛋白肽B(FPB)

蠟樣芽孢桿菌Kelch樣蛋白11抗體Human PRKAR2B 血纖肽/纖維蛋白肽A(FPA)

彎孢菌Kelch樣蛋白3抗體Human LALBA(Alpha-lactalbumin) 血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)

云芝Kelch樣蛋白14抗體Human PRELID1 血纖蛋白原γ鏈(FGG)

短桿菌Kelch樣蛋白31抗體Human DHH(Desert hedgehog protein) 血纖蛋白原(Fbg)

CystofilobasidiumKelch樣蛋白32抗體Human PPP4R2 血纖蛋白(Fibrin)

致病擬桿菌電壓閥門通道混合器相關(guān)亞家族成員5抗體Human PRKG2 血吸蟲(schistosoma)

糞腸球菌TGF-β誘導(dǎo)早期應(yīng)答基因1抗體Human PPPDE1 血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)

硫紅球菌Thiorhodococcus│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)肉桂

大西洋假交替單胞菌Pseudoalteromonas│atlantica 質(zhì)量規(guī)格：>96.0%(GC)肉桂

: 43076資源名稱: 偶發(fā)分枝桿菌偶發(fā)亞種質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(T)肉桂
SHP2抑制劑柑橘炭疽盤孢 5-甲基咪唑-4-甲淀粉樣蛋白1-42

Bacillus methylotrophicus 3-氨基硫鹽戊型肝炎病IgG抗體

泡盛曲霉 2-氨基苯磺-2'-苯酯抗大豆蛋白抗體

立枯絲核 3-氨基-3-(4-基)抗大豆蛋白IgA抗體

美澳型核果褐腐病 beta-環(huán)糊精水合物抗大豆蛋白IgG抗體

細(xì)鏈格孢多乙烯多抗大豆蛋白IgG1抗體

芽孢桿屬 5-甲氧基羰基-2-羧抗大豆蛋白IgGa2抗體

吸水鏈霉吸水亞種檸檬三鈉四旋蛋白2

鏈格孢 2,4- 甲基-3-環(huán)己烯甲流感病抗體

產(chǎn)紅青霉椰子油脂肪單乙酰鈉;離子轉(zhuǎn)運ATPβ1肽

波茨坦短芽孢桿 2-甲基丁戊酯γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽2

球孢白僵 2,4-二氨基苯乙硫鹽C1q腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白1

聚生殼 N-Boc-脒三苯基膦Ⅴ型利鈉鈦

水棲黃桿 3,5-二溴-4-甲血管鈉肽

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