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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> VEGFR3抑制劑(SAR131675)
貨號(hào) | FS-X10798 |
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中文名稱(chēng):VEGFR3抑制劑(SAR131675)
英文名稱(chēng):SAR131675
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg
貨號(hào):FS-X10798
產(chǎn)品介紹:
SAR131675是有效,選擇性的VEGFR3抑制劑,IC50值為23nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):1433953-83-3 純度:99.80% 分子量:358.39 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
栗疫菌人巨噬趨化因子Anti-MRPS18A Antibody人單純皰疹病抗原2(HSV-Ag2)
金針菇小鼠c-junAnti-MRPS2 Antibody人單純皰疹病抗原2(HSV-Ag2)
嗜中溫寒冷桿菌人α/β干擾受體Anti-MRPS24 Antibody人游離前列腺特異性抗原(fPSA)
釀酒酵母大鼠骨堿性磷Anti-MRPS22 Antibody人游離前列腺特異性抗原(fPSA)
銀白離褶傘槐凝集Anti-MRPS21 Antibody人前列腺特異性抗原(PSA)
果生鏈核盤(pán)菌兔血管內(nèi)皮粘附分子1Anti-MRPS25 Antibody人前列腺特異性抗原(PSA)
原小單胞菌花生凝集Anti-MRPS30 Antibody人磷脂酰絲(PS)
雞傷門(mén)氏菌人B生長(zhǎng)因子Anti-MRPS27 Antibody人磷脂酰絲(PS)
Flavihumibacter兔血纖蛋白原Anti-MRPS25 Antibody人磷甘油酯(PC/CPG)
瓶形毛殼大鼠凝聚Anti-MRPS34 Antibody人磷甘油酯(PC/CPG)
惡臭假單胞菌小鼠抗透明帶抗體Anti-MRPS33 Antibody人總膽汁(TBA)
繩狀籃狀菌人B分化因子Anti-MRPS35 Antibody人總膽汁(TBA)
異常威克漢姆酵母兔子D二聚體Anti-MRPS36 Antibody人載脂蛋白C3(Apo C3)
枯草芽孢桿菌大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β激蛋白22Anti-MRPS9 Antibody人載脂蛋白C3(Apo C3)
冠突曲霉小鼠粘蛋白/粘液7Anti-MRPS7 Antibody人膽固(CH)
嬰兒芽胞桿菌大豆凝集Anti-MRPS5 Antibody人膽固(CH)
12號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框52抗體多年擬層孔小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞與大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞之融合細(xì)胞
梅克爾憩室綜合征相關(guān)蛋白5抗體松生擬層孔菌人結(jié)腸腺癌細(xì)胞
β1,3-N-乙酰糖基轉(zhuǎn)移抗體扁芝人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤
受體活性修飾蛋白2抗體松杉靈芝人子宮內(nèi)膜腺癌(轉(zhuǎn)移)細(xì)胞
VEGFR3抑制劑(SAR131675)釀酒酵母 3-(芐基氨基)乙酯淀粉
植物乳桿 土霉麥芽提取物瓊脂培養(yǎng)基胃蛋白
黑根霉 馬鈴薯液體培養(yǎng)基(含霉)纖維
小孢擬盤(pán)多毛孢 含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆瓊脂(TSA-YE)顆粒核因子κB抑制蛋白α
肉桂色曲霉 4-溴-2-氟苯甲激動(dòng)異構(gòu);分裂MB
伏克盾殼霉 RV沙門(mén)增液體培養(yǎng)基(中國(guó)藥典)ATP
芽殖酵母 硝鹽蛋白胨水培養(yǎng)基肌紅蛋白
冷溫木拉克酵母 改良察氏液體培養(yǎng)基促胰液
污水德沃斯氏 4-氟-3-三氟膽囊收縮
聚生殼 2-氨基-5-巰基-1,3,4-噻二唑抑胃肽
地衣芽孢桿 2-甲基-2-噻唑啉胃動(dòng)
香菇 3,4-二甲氧基肉桂XIIa
厚環(huán)乳牛肝 4-乙酰氧基XIa
橄欖色毛殼 N,N'-二甲基-9,9'-聯(lián)吖啶鎓硝鹽CD41a
果生鏈核盤(pán) TB培養(yǎng)基間粘附分子4
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