缺氧誘導(dǎo)因子-1抑制劑(HIF-1抑制劑)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X10548

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：缺氧誘導(dǎo)因子-1抑制劑(HIF-1抑制劑)

英文名稱：BAY 87-2243

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10548

產(chǎn)品介紹:

BAY87-2243是一種有效的選擇性的缺氧誘導(dǎo)因子-1(HIF-1)抑制劑。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1227158-85-1

純度：99.41%

分子量：525.53

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

毛柄金錢菌(金針菇)血管內(nèi)皮粘附分子抗體Anti-MAPK6 Antibody溶質(zhì)載體家族30成員8(SLC30A8)

蛾微桿菌血管內(nèi)皮生長因子抗體Anti-MAPK6 Antibody(PB0706)溶質(zhì)載體家族26成員4(SLC26A4)

假土曲霉血管內(nèi)皮生長因子受體1抗體Anti-MAPK3 Antibody溶質(zhì)載體家族1成員5(SLC1A5)

里亞氏須腹菌血管內(nèi)皮生長因子受體2抗體Anti-MAPK6 Antibody溶質(zhì)載體家族16成員3(SLC16A3)

美澳型核果褐腐病菌血管內(nèi)皮生長因子受體3抗體Anti-MAPK8 Antibody溶質(zhì)載體家族16成員1(SLC16A1)

釀酒酵母波形蛋白抗體Anti-MAPT Antibody溶血酰基轉(zhuǎn)移4(LPCAT4)

淡紫擬青霉血管活性腸肽抗體Anti-MAPK8 Antibody溶血?；D(zhuǎn)移3(LPCAT3)

球形芽孢桿菌內(nèi)脂/內(nèi)臟脂肪/前B克增強(qiáng)因子1抗體Anti-MAS1 Antibody溶血酰基轉(zhuǎn)移2(LPCAT2)

哈茨木霉內(nèi)脂/內(nèi)臟脂肪/前B克增強(qiáng)因子1抗體Anti-MAPK9 Antibody溶血?；D(zhuǎn)移1(LPCAT1)

鐮刀菌屬玻璃粘連蛋白抗體Anti-MASP2 Antibody溶血磷脂酰乙酰基轉(zhuǎn)移1(LPEAT1)

枯草芽孢桿菌血管內(nèi)皮生長因子A抗體Anti-MAVS Antibody溶血磷脂酰肌?；D(zhuǎn)移(LPIAT)

蠟狀芽孢桿菌血管內(nèi)皮生長因子B抗體Anti-MATN3 Antibody溶血磷脂酰甘油?；D(zhuǎn)移1(LPGAT1)

露濕擬漆斑菌VAMP1囊泡相關(guān)膜蛋白1抗體Anti-MB Antibody溶血磷脂受體3(LPAR3)

黃多孔菌囊泡相關(guān)膜蛋白2抗體Anti-MAX Antibody溶血磷脂受體1(LPAR1)

龜裂鏈霉菌龜裂亞種基丁轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白VGAT抗體Anti-MB Antibody溶血磷脂Ⅲ(LYPLA3)

少根根霉戴爾變種氫離子轉(zhuǎn)運(yùn)ATP合成A1抗體Anti-MBD1 Antibody溶血磷脂Ⅱ(LYPLA2)

硫軟骨多糖核心蛋白抗體腸乳桿菌大鼠小腦顆粒細(xì)胞

線粒體載體腺核轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白6抗體沼澤考克氏菌大鼠神經(jīng)元細(xì)胞

Bcl2結(jié)合抗凋亡蛋白4抗體都柏林沙門氏菌大鼠嗅鞘細(xì)胞

分泌型白細(xì)胞蛋白抑制因子抗體腸沙門氏菌腸亞種雞血清型大鼠神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞
缺氧誘導(dǎo)因子-1抑制劑(HIF-1抑制劑)芽孢桿屬 3,5-二甲氧基肉桂，主要為反式D-乳

大腸埃希氏桿 1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphate (sodium sal雄烯二酮

三化金溶液二氫睪酮

平菇 N-(3-Oxododecanoyl)-L-homoserine lactone雌三

綠膿桿四乙基硫氫雌酮

假單胞屬六鋨Ⅰ型前膠原C末端肽

猴頭菇 (S)-1-芐基-3-氨基卵黃球蛋白

班戈錯湖嗜鹽堿紅 (R)-3-氨基-1-芐基抗凝血Ⅲ

新疆鹽地桿 2,3-二苯基喹喔啉H9型病抗體

楊奇青霉對甲苯磺銀羥賴吡啶啉

長雙歧桿嬰兒亞種 5,10,15,20-四(4-吡啶基)卟啉還原糖

鏈格孢 3,4-二氟苯過氧化物

金黃色葡萄球RN4220 (+)-2-甲基-L-絲無翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員4

芽孢桿屬 5-溴-2-苯甲骨堿性磷

鹽生鹽古桿 6,7-二氫-4(5H)-苯并呋喃酮I型前膠原N端前肽
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)