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參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:人星狀病毒(HastV)核酸檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品貨號:FS-P10490
產(chǎn)品分類:熒光PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。
產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
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實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
實時熒光定量PCR:
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的局限,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強(qiáng)度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此,實時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的:
1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性,即同一模板不同時間擴(kuò)增或同一時間不同管內(nèi)擴(kuò)增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確,重現(xiàn)性*定量方法,已得到的*,廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
定量PCR方法:
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴(kuò)增(其中一個引物為熒光標(biāo)記)。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測定熒光強(qiáng)度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時,內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強(qiáng)度,以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等標(biāo)記引物,擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,再加入抗di高辛或生物素酶標(biāo)抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內(nèi)標(biāo),作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,也可實現(xiàn)定量檢測目的。
植物乳桿菌培養(yǎng)基: 6模式菌株: no咸菜提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 37℃ -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法;其他
AJ12874FERMBP4733培養(yǎng)基: 666模式菌株: no種屬: Escherichia│coli提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 37℃ 真空冷凍干燥法
柱狀田頭菇(茶樹菇、楊樹菇)培養(yǎng)基: 0014食用提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 25℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;礦物油法;定期移植法
地衣芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶和淀粉酶。模式菌株: no淤泥提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 33生長條件: 37℃
-729℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
蠟樣芽孢桿菌用于研究模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 2生長條件: 30℃
吉氏假單胞菌潛在的生物活性微生物/軟珊瑚共附生菌,用于篩選活性物質(zhì)產(chǎn)生菌;產(chǎn)酶微生物/脂酶(三丁甘油酯).模式菌株: no生物樣/軟珊瑚提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 471生長條件: 28℃
動性球菌培養(yǎng)基: 471大洋細(xì)菌沉積物/深海沉積物提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no生長條件: 4-20℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
嗜熱地芽孢桿菌生長條件: 75℃培養(yǎng)基: 2提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
枯草芽孢桿菌生長條件: 35-37℃培養(yǎng)基: CM0003提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 真空冷凍干燥法
尖鐮孢西瓜?;?/font>(西瓜枯萎病菌)生長條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 0014提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no
-730℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
大腸埃希菌研究基因和致病性的關(guān)系模式菌株: no雞腸道內(nèi)容物提供形式: 凍干物安全等級: 2培養(yǎng)基: 335生長條件: 37
乳乳球菌生長條件: 30℃培養(yǎng)基: 6提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 定期移植法
ATCC28266=CBS6386=CCRC22477=DBVPG7024=IFO100模式菌株: yes安全等級: 1種屬: Rhodotorula│acheniorumfruit of Fragaria vesca (strawberry)提供形式: 凍干物模式菌株培養(yǎng)基: 0013
近平滑假絲酵母近海酵母模式菌株: no生物樣/馬布魚提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 513生長條件: 28℃
2--5-硼 丁酐 4-羥丁基基醚
2-嘧啶甲脒鹽鹽 NA 酐 偶姻異丁基醚
3--6-硝基吲唑 七丁酐 芐醚
2-巰基-5-甲氧基咪唑[4,5-b] 2,3-二甲基馬來酐 2,2-二嗎啉基
EOSIN B 曙紅B 548-24-3
Alizarin Red S 茜素紅 130-22-3
CARMINE 胭脂紅 1390-65-4
NUCLEAR FAST RED 核固紅 6409-77-4
大鼠誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(iNOS)ELISA試劑盒 ,英文名: iNOS ELISA Kit
人氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)ELISA檢測試劑盒Humanoxidizedlowdensitylipoproteinaibody,OLAbELISAKit 96T/48T
大鼠白介素2(IL-2)免疫試劑盒 Rat Ierleukin 2,IL-2 ELISA kit
CLIAKitfoFELISAKit大鼠組織因子規(guī)格:48T/96T
人體EIF-2AK3RFLP基因分析試劑盒20次
ELISAKitATGA/TGAB人抗甲狀腺球蛋白抗體規(guī)格:48T/96T
人星狀病毒(HastV)核酸檢測試劑盒D-四氫藥根13063-54-2英文名:(R)-(+)-Corypalmine
英文別名:dl-Tetrahydrojatrorrhizine
登錄號:13063-54-2
分子式:C20H23NO4
分子量:341.16
分子結(jié)構(gòu):
規(guī)格:20mg/支
純度:≥ 98%
用途:用于含量測定/鑒定/藥理實驗等。
提取來源:夏天無原藥材
藥理藥效:藥根在治療炎癥、細(xì)菌和病感染、糖尿病、心血管疾病、精神疾病等多方面具有藥效作用。
貯存條件: 4℃冷藏、密封、避光
有效期: 2年
PCR的反應(yīng)條件:
因擴(kuò)增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴(kuò)增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴(kuò)增片段的大小,設(shè)定25~30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少,擴(kuò)增量不足;如果循環(huán)次數(shù)太多,則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預(yù)備實驗可2℃間隔進(jìn)行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進(jìn)行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時,每kbp大體可設(shè)定30秒~1分鐘;當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時, 時間設(shè)定可稍長一些。通常,Anneal溫度太高,有時會得不到擴(kuò)增產(chǎn)物;Anneal溫度太低時,容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外,Extension時間太短時,會得不到擴(kuò)增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成;而Extension時間太長時,會出現(xiàn)Smear。
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