實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
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參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：人細小病毒B19（HPV B19）核酸檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品貨號：FS-P10485
產(chǎn)品分類：熒光PCR法
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。
產(chǎn)品特點：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內(nèi)標和引物，內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗di高辛或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。
PCR的反應條件：
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴增片段的大小，設定25～30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設定30秒～1分鐘；當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時，容易發(fā)生非特異性反應。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時間太長時，會出現(xiàn)Smear。
 -717℃冰箱凍結；真空冷凍干燥

奧默柯達菌近海酵母模式菌株: no生物樣/條富魚提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 513生長條件: 28℃

Cladosporium sphaerospermum培養(yǎng)基: CM0014模式菌株: no葉提供形式: 凍結物安全等級: 1生長條件: 25C -80℃冰箱凍結；礦物油法

片球菌屬發(fā)酵產(chǎn)乳，青貯飼料，制作泡菜。模式菌株: no泡豬耳朵汁提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0006生長條件: 37℃

 ivcas7.00442培養(yǎng)基: 0002模式菌株: no種屬: Bacillus│thuringiensis提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 30℃ 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

豬丹絲菌血清定性模式菌株: no丹豬提供形式: 凍干物安全等級: 2培養(yǎng)基: 396生長條件: 37

大腸埃希氏菌生長條件: 37℃培養(yǎng)基: 2提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 真空冷凍干燥法

 -718℃冰箱凍結；真空冷凍干燥

盤長孢狀刺盤孢培養(yǎng)基: 14模式菌株: no北京楊提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1生長條件: 25 定期移植法

大腸埃希氏菌培養(yǎng)基: 33atzA基因克隆，阿特拉津水解酶(Atrazine chlorohydrolase，AtzA)基因的編碼產(chǎn)物能將有的阿特拉津脫水解成無的羥基阿特拉津。提供形式: 凍結物安全等級: 2模式菌株: no生長條件: 37℃ 液氮超低溫凍結法；-80℃冰箱凍結法；定期移植法

庫爾勒海洋桿菌培養(yǎng)基: 820模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 30℃ 真空冷凍干燥法

固氮菌固氮。模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 3生長條件: 28-30

百日咳博德特氏菌生長條件: 37℃培養(yǎng)基: CM0119提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no 真空冷凍干燥法

#雙孢蘑菇生長條件: 25培養(yǎng)基: 14提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no 定期移植法

 -719℃冰箱凍結；真空冷凍干燥

莖點霉屬培養(yǎng)基: CM0014;馬鈴薯、葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA);馬鈴薯提取液1.0L，葡萄糖20.0g，瓊脂15.0g，pH自然。[注]馬鈴薯提取液模式菌株: no空氣提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 25℃;好氧 -80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法

2--6-基嘌呤  安息香肟  檀香 803

3,5-二鹽鹽  肟  9-三乙酰

2,4-二-6,7-二氫噻吩[3,2-D]嘧啶  (1R)-樟腦肟  2-乙基-4-甲基咪唑

5-溴-2--4-甲氧基嘧啶  乙肟  駢三氮唑

MOLECULAR SIEVE  13X分子篩  63231-69-6

MOLECULAR SIEVE  5A分子篩  69912-79-4

D-Glucal  D-葡萄烯糖  13265-84-4

MOLECULAR SIEVES PACK 4A  4A分子篩  70955-01-0

大鼠游離狀腺原(fT3)ELISA試劑盒 ，英文名： fT3 ELISA Kit

Duck ierleukin 1 (IL-1) ELISA Kit 鴨白介素1(IL-1)ELISA試劑盒

MouseNervegrowthfactor,NGFELISAkit 小鼠神經(jīng)生長因子(NGF)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanelonginA,EloAELISAKit人延伸蛋白A規(guī)格：48T/96T

3-羥-3-甲戊二酰輔酶A(HMG-COA)合成酶活性比色法定量檢測試劑盒20次

ELISAKitActivin-A大鼠活化素A規(guī)格：48T/96T
人細小病毒B19（HPV B19）核酸檢測試劑盒D(+)-無水葡萄糖50-99-7中文別名：葡萄糖；右旋糖  

英文名：D(+)-Glucose  

登錄號：50-99-7

分子式：C6H12O6

分子量：180.16

分子結構：

外觀：白色結晶或顆粒狀粉末

規(guī)格：20mg/支

純度：≥ 98%

用途：用于含量測定/鑒定/藥理實驗等。

提取來源：淀粉性水解制得。

溶解性：易溶于水，微溶于乙醇、，不溶于。

熔點：146℃（無水α-D-葡萄糖），148～150℃（β-D-葡萄糖）

旋光度： 組成α：β=37：6,+112->52.7°(c=10,水)藥理藥效：

營養(yǎng)物。用于血糖過低、心肌炎和補充體液等。高滲溶液用于腦水腫、肺水腫等。

貯存條件： 4℃冷藏、密封、避光

有效期： 2年