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貨號	FS-X10711

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：Ro31-8220甲磺酸鹽是廣譜PKC抑制劑

英文名稱：Ro 31-8220 mesylate

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg

貨號：FS-X10711

產(chǎn)品介紹:

Ro31-8220(Bisindolylmaleimide IX)甲磺酸鹽是廣譜PKC抑制劑，對PKC-α，PKC-βI，PKC-βII，PKC-γ和PKC-ε的IC50分別為5nM，24nM，14nM，27nM和24nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：138489-18-6

別名：Ro 31-8220 methanesulfonate;Bisindolylmaleimide IX mesylate

純度：99.50%

分子量：553.65

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

動性球菌磷脂?；鞍拙厶?/span>-3(多肽)Anti-CMTM3 Antibody人γ干擾誘導單核因子(MIGF/CXCL9)

假單胞菌磷脂?；鞍拙厶?/span>-4抗原Anti-CMTM5 Antibody人γ干擾誘導單核因子(MIGF/CXCL9)

淺黃鏈霉菌生長因子受體結合蛋白2抗原Anti-CMTM6 Antibody人干擾誘導T趨化因子(ITAC/CXCL11)

宇佐美曲霉顆粒B抗原Anti-CMTM6 Antibody人干擾誘導T趨化因子(ITAC/CXCL11)

高羊肚菌G蛋白偶聯(lián)受體14抗原Anti-CMTM8 Antibody人CD14分子(CDl4)

膨大彎頸霉G蛋白偶聯(lián)受體30抗原Anti-CNGA1 Antibody人CD14分子(CDl4)

秦氏蜜環(huán)菌促性腺激釋放激受體抗原Anti-CNGA1 Antibody人凋亡誘導因子(AIF)

巨型艾美耳球蟲G蛋白偶聯(lián)受體54抗原Anti-CNGA1 Antibody人凋亡誘導因子(AIF)

巨枝膝梗霉G蛋白偶合受體激2抗原Anti-CNGA2 Antibody人白共同抗原(LCA/CD45)

麥根腐平臍蠕孢促代謝型谷受體2抗原Anti-CNKSR1 Antibody人白共同抗原(LCA/CD45)

乳片球菌生長調(diào)節(jié)致癌基因α/黑瘤生激因子α 抗原Anti-CNGA2 Antibody人CD4分子(CD4)

中國臺灣根霉葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78抗原（熱休克蛋白70蛋白5）Anti-CNKSR1 Antibody人CD4分子(CD4)

靈芝還原抗原Anti-CNKSR2 Antibody人P鈣黏蛋白/胎盤鈣黏蛋白(P-cad)

彎孢菌A型人流感病H1N1-M2蛋白多肽Anti-CNKSR2 Antibody人P鈣黏蛋白/胎盤鈣黏蛋白(P-cad)

鹽水海桿狀菌A型豬流感病H1N1-M2蛋白Anti-CNN2 Antibody人角化生長因子(KGF)

白地霉流感病A抗原Anti-CNOT4 Antibody人角化生長因子(KGF)

蛋白體PSMα1抗體假結核耶爾森氏菌大鼠骨骼肌成肌細胞

蛋白體PSMα2抗體小腸結腸炎耶爾森氏菌人正常卵巢上皮細胞

蛋白體PSMα6抗體缺陷短波單胞菌類風濕關節(jié)炎成纖維樣滑膜細胞

蛋白體PSMα7抗體乳片球菌牛子宮內(nèi)膜上皮細胞
Ro31-8220甲磺酸鹽是廣譜PKC抑制劑Xenorhabdus 乙酰氧肟皮質(zhì)

黃曲霉二巰基馬來二鈉皮質(zhì)酮;腎上腺酮

草青霉八苯基環(huán)四硅氧烷前列環(huán)

膠孢 N-（3-溴基）鄰苯二甲酰亞前列腺E2

釀酒酵母 2,6-吡啶二甲二甲酯

假單胞 1-溴-5-戊烷去甲腎上腺

流散隱球酵母 2-甲酯全段甲狀旁腺

擬可可毛球二孢 α-溴肉桂固酮

杏鮑菇溴乙芐酯狀腺原

谷棒桿 3-甲基-2-甲三葉因子3

四川散斑殼 4,4-二甲氧基-2-丁酮神經(jīng)肽Y

嗜熱脂肪芽孢桿 4-氨基苯二甲神經(jīng)元烯化

熱帶假絲酵母 2-氨基-5-嘧啶腎

蠟葉曲霉代環(huán)己烷腎損傷分子1

酒色青霉 1,3-酮二羧生長分化因子15
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)